[发明专利]同时测定水样中五类抗生素残留量的方法

权利要求书

1.一种同时测定水样中五类抗生素残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

将待测水样进行过滤处理，再将pH调至3.8-4.0，然后添加络合剂，配制成预处理水样；

将所述预处理水样进行固相萃取处理，再对所述固相萃取处理的固相进行净化处理和洗脱处理，得到含抗生素的洗脱液；

将所述洗脱液进行浓缩处理，得到含抗生素的浓缩待测样品；

将所述浓缩待测样品采用初始流动相进行定容处理，得到定容样品溶液，再对所述定容样品溶液进行过滤处理，接着添加确定含量的同位素内标物，得到抗生素待测液；

利用超高效液相色谱串联质谱对所述抗生素待测液进行抗生素的检测分析处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述五类抗生素为四环素类抗生素、磺胺类抗生素、氟喹诺酮类抗生素、大环内酯类抗生素和β-内酰胺类抗生素。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述四环素类抗生素包括盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸土霉素中的至少一种；

所述磺胺类抗生素包括磺胺甲噁唑、磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺二甲异噁唑、磺胺甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪中的至少一种；

所述氟喹诺酮类抗生素包括诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星中的至少一种；

所述大环内酯类抗生素包括泰乐菌素；

所述β-内酰胺类抗生素包括阿莫西林、氨苄西林、头孢氨苄、头孢匹林、头孢唑啉、头孢噻呋、哌拉西林、青霉素G钾、青霉素V钾、双氯西林中的至少一种。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：将所述待测水样进行过滤处理是将所述待测水样过0.45μm玻璃纤维滤膜过滤处理；和/或

所述络合剂为Na₂-EDTA络合剂；

所述络合剂是按照所述络合剂饱和溶液与所述待测水样的体积比为10：(500-1000)的比例进行添加；和/或

所述将pH调至3.8-4.0的溶液为稀磷酸溶液。

5.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述固相萃取处理是将所述预处理水样通过经活化处理的HLB固相萃取柱；

所述净化处理是使用0％v/v-25％v/v甲醇溶液对经所述固相萃取处理后的固相进行淋洗处理；和/或

所述洗脱处理是使用65％v/v-100％v/v甲醇溶液对经所述净化处理后的固相进行洗脱处理，并收洗脱溶液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述HLB固相萃取柱的所述活化处理包括如下步骤：

先用甲醇通过HLB固相萃取柱，再用超纯水两次通过HLB固相萃取柱，之后抽真空干燥处理；其中，所述预处理水样通过所述HLB固相萃取柱的流速为2-3mL/min。

7.根据权利要求1-3、6任一项所述的方法，其特征在于：将所述洗脱液进行浓缩处理是将所述洗脱液于40-50℃下进行蒸发处理。

8.根据权利要求1-3、6任一项所述的方法，其特征在于：所述初始流动相为甲醇与甲酸水混合溶液；其中，甲醇与0.1％甲酸水的体积比为1:9；

所述同位素内标物包括四环素-D₆、¹³C₆-磺胺甲噁唑、阿莫西林-D₄和诺氟沙星-D₅。

9.根据权利要求1-3、6任一项所述的方法，其特征在于：所述同位素内标物是按照如下的比例加入所述定容样品溶液中：每1mL所述定容样品溶液中分别添加5mg/L的四环素-D₆、10mg/L的¹³C₆-磺胺甲噁唑、10mg/L的阿莫西林-D₄和50mg/L的诺氟沙星-D₅各10μL。

10.根据权利要求1-3、6任一项所述的方法，其特征在于：所述超高效液相色谱的条件为：流动相A为含有0.1％甲酸的超纯水，流动相B为含0.1％甲酸的甲醇溶液，流速为0.3mL/min，进样量为2μL，总洗脱时间为10.01min；洗脱梯度顺序为：0min，10％B；3.5min，40％B；4min，48％B；4.5min，30％B；6min，100％B；8min，100％B；10.01min，10％B；和/或

所述质谱条件为：离子源为安捷伦喷射流式电喷雾离子源；扫描方式为正离子扫描；检测方式为动态多反应监测；干燥气温度和流速：325℃，8L/min；毛细管电压为3500V；电喷雾压力为50psi。