[发明专利]一种检测血液中水溶性维生素的方法

说明书

本发明提供了一种检测血液中水溶性维生素的方法，包括：利用液相色谱‑质谱联用仪检测检测至少三种浓度的混合标准溶液，得第一检测结果，其中，混合标准溶液包括内标物和水溶性维生素，水溶性维生素包括维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5‑甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C；基于第一检测结果和水溶性维生素的浓度拟合水溶性维生素分别对应的标准曲线方程；将加有沉淀蛋白试剂和一定量内标物的待测血液样本离心，取上清液，并利用液相色谱‑质谱联用仪进行检测，得第二检测结果；基于标准曲线方程和第二检测结果，得到待测血液样本中水溶性维生素的浓度。本方案能够提高血液样本的检测效率。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及一种检测血液中水溶性维生素的方法。

背景技术

水溶性维生素(water-soluble vitamins)是能在水中溶解的一组维生素，是人体维持正常生理功能所必须的一类微量有机物质，适量摄取对生长、代谢、发育都起到了积极的促进作用，而过量摄入却会造成严重危害。所以对血液中水溶性维生素的检测，在临床用药中具有重大意义。

目前常用的血液中水溶性维生素浓度的测定方法众多，各有优缺点，主要以高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法等。大多存在检测项目单一，检测速度慢，分析时间长，成本较高等问题。

发明内容

本发明实施例提供了一种检测血液中水溶性维生素的方法，包括：

制备至少三种浓度的混合标准溶液，其中，所述混合标准溶液为具有内标物、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C的溶液，且所述至少三种浓度的混合标准溶液中内标物的浓度相同；

利用液相色谱-质谱联用仪在预设的检测条件下，分别检测每一种所述混合标准液，获得所述至少三种浓度分别对应的第一检测结果；

根据各个所述第一检测结果、所述混合标准溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12、维生素C和内标物的浓度，分别拟合维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C分别对应的标准曲线方程；

向待测血液样本中加入沉淀蛋白试剂和与所述混合标准溶液中相同量的内标物，并进行高速离心处理，取离心处理后的上清液；

利用利用液相色谱-质谱联用仪在所述检测条件下检测所述上清液，获得所述待测血液样本对应的第二检测结果；

基于维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C分别对应的标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测血液样本中维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B5、吡哆酸、磷酸吡哆醛、维生素B7、维生素B9、5-甲基四氢叶酸、维生素B12和维生素C的浓度。

优选地，

所述检测条件中的色谱条件，包括：

T3反相色谱柱；柱温为20～50℃；

进样量为0.1～100μL；

流速为0.1～0.5mL/min；

流动相为甲醇和超纯水，所述超纯水中含有0.01％～0.2％甲酸和0.1～10mM甲酸铵，其中，所述流动相采用梯度洗脱。

优选地，

所述检测条件中的质谱条件，包括：