[发明专利]一种检测血液中7-酮基胆固醇含量的方法

说明书

本发明提供了一种检测血液中7‑酮基胆固醇含量的方法，该方法包括：利用高效液相串联质谱仪分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，该标准溶液含浓度已知的7‑酮基胆固醇和内标物；根据得到的标准溶液的色谱图，拟合得到标准曲线方程；处理待检测血液得到血液样品，并加入浓度已知的内标物，经样品前处理以得到待测样品；在相同检测条件下检测待测样品得到色谱图；根据待测样品的色谱图和标准曲线方程，得到待检测血液中7‑酮基胆固醇的含量。因此，本方案能够检测血液中7‑酮基胆固醇的含量。

技术领域

本发明涉及临床化学技术领域，特别涉及一种检测血液中7-酮基胆固醇含量的方法。

背景技术

7-酮基胆固醇是一种胆甾烷类化合物，由7位带有氧代取代基的胆固醇组成。

尼曼-皮克病是一种先天性糖脂代谢异常性疾病，是一种罕见神经退行性疾病，分为A型，B型和C型。该疾病会造成内脏和中枢神经系统中胆固醇和其他脂质的积聚。A型和B型是由鞘磷脂酶缺乏引起的，该酶导致在肝脏、脾脏、肺部和大脑中广泛储存鞘磷脂和胆固醇，A型和B型综合患病率估计为25万分之一，但发病后生存率极低。C型是由细胞胆固醇转运缺陷引起的，该缺陷导致晚期患者体内溶酶体中未酯化胆固醇的累积。在A型和B型疾病的患者血浆中，发现7-酮基胆固醇、胆甾醇-3β、5α、6β三醇胆固醇、羟甾醇溶血磷脂(LSM)、溶血磷脂509(LSM 509)显著升高，而C型疾病的患者的血浆中7-酮基胆固醇等胆固醇氧化产物在血浆中显著升高。同时，7-酮基胆固醇和胆甾醇-3β、5α、6β三醇被认为是诊断鼻咽癌疾病的生物标志物。而目前尼曼-皮克病的诊断标准缺乏灵敏性和特异性，甚至会造成该疾病的诊断延迟，所以疾病早期的干预对于尼曼-皮克病及鼻咽癌的诊断及预防有着非常重要的意义。

如此，定量分析人体血液中7-酮基胆固醇的含量对于诊断预防尼曼-皮克病具有重要的临床意义，但目前尚未有血液中7-酮基胆固醇含量的检测方法。

发明内容

本发明提供了一种检测血液中7-酮基胆固醇含量的方法，能够检测血液中7-酮基胆固醇的含量。

为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

本发明提供了一种检测血液中7-酮基胆固醇含量的方法，包括：

利用高效液相串联质谱仪，在一定检测条件下，分别检测至少三个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，其中，任一标准溶液中均含有浓度已知的7-酮基胆固醇和浓度已知的内标物，不同标准溶液中7-酮基胆固醇的浓度不同；

根据得到的各个标准溶液的色谱图，拟合得到标准曲线方程；

处理待检测血液得到血液样品；

将一定量的含有浓度已知的内标物的内标工作液，添加到所述血液样品中，并进行样品前处理以得到待测样品；

利用高效液相串联质谱仪，在相同检测条件下，检测所述待测样品，得到所述待测样品的色谱图；

根据所述待测样品的色谱图和所述标准曲线方程，得到所述待检测血液中7-酮基胆固醇的含量。

优选地，所述检测条件中的液相条件包括：色谱柱的长度为50mm、内径为2.1mm、填料粒径为2.6μm，流动相为含体积比为0.1％-0.5％甲酸的水和含体积比为0.1％-0.5％甲酸的甲醇，分析时间为4.5min，柱温为20℃-40℃，进样量为0.1μL-30μL，流速为0.40mL/min-0.60mL/min。

优选地，所述液相条件还包括：Phenomenex公司的Kinetex C18色谱柱。

优选地，所述液相条件还包括：洗脱过程为：含体积比为0.3％甲酸的水和含体积比为0.3％甲酸的甲醇的百分用量比，在2.41min-3.50min的洗脱时间范围内为0：100，在其他洗脱时间范围内为15:85。