[发明专利]一种获取神经元的方法

说明书

本发明提供了一种获取神经元的方法，属于生物医药技术领域，包括以下步骤：1)将神经核团与木瓜蛋白酶混合，将得到的混合物进行酶解、吹打，得到滤液；所述混合物中木瓜蛋白酶的酶活力单位为18～22U/ml；2)将所述步骤1)得到的滤液与红细胞裂解液混合后进行裂解，得到裂解物；3)将所述步骤2)得到的裂解物离心后，得到的沉淀为神经元。神经核团经木瓜蛋白酶酶解释放出神经元，得到的滤液中除含有神经元外还含有红细胞，红细胞裂解液将红细胞裂解后，再经过离心，将细胞碎片除去，得到神经元。神经元的胞体直径平均为10μm，活性高、聚团率低，适用于10×单细胞测序。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种获取神经元的方法。

背景技术

单细胞测序是指在单个细胞水平上，对基因组、转录组、表观组等进行高通量测序分析的新技术，用于揭示单个细胞的基因结构和基因表达状态，反映细胞间的异质性，并被Science列为2013年度最值得关注的六大领域榜首。单细胞测序可应用于神经系统细胞、发育生物学等方向的研究。大脑的神经系统由成千上万种不同类型的神经细胞构成，这些神经细胞在细胞形态，突触连结及生理功能上具有高度的多样性。不同种类的神经细胞中，其基因组、蛋白组、化学分子组成、代谢也都有着很大的差别。单细胞转录组测序通过对单个神经元的RNA进行测序，分析每个细胞中的基因表达情况，对细胞进行分类比较，为神经发育、神经调控代谢、药效预测、新药研发等提供新的方向。

为了对每个细胞中的RNA进行单独标记用于数据分辨，标记完成前的细胞必须是单个悬浮且完整的活细胞，因此单细胞测序对样本要求较高，包括细胞悬浮状态、浓度、活性等。而神经元又由于其脆弱性，更对单细胞提取提出挑战，因此有必要开发一种新的样本处理方法，更便捷地获得合适的样本进行单细胞转录组测序。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种获取神经元的方法，采用本发明得到的神经元的胞体直径平均为10μm，活性高、聚团率低，适用于10×单细胞测序。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种获取神经元的方法，包括以下步骤：

1)将神经核团与木瓜蛋白酶混合，将得到的混合物进行酶解、吹打，得到滤液；所述混合物中木瓜蛋白酶的酶活力单位为18～22U/ml；

2)将所述步骤1)得到的滤液与红细胞裂解液混合后进行裂解，得到裂解物；

3)将所述步骤2)得到的裂解物离心后，得到的沉淀为神经元。

优选的，所述红细胞裂解液的组分包括：0.1～0.2M NH₄CL、8～12mM KHCO₃、0.05～0.15mM Na₂EDTA、0.03～0.08mM DL-AP5和0.03～0.08mM犬尿氨酸。

优选的，所述滤液与红细胞裂解液的体积比为(0.5～1.5):(2.5～3.5)。

优选的，所述步骤2)裂解的时间为8～12min。

优选的，所述步骤1)神经核团与木瓜蛋白酶混合时，还与L-半胱氨酸、Na₂EDTA、DNase-I混合后，得到混合物；所述混合物中L-半胱氨酸的浓度为0.8～1.2M，所述混合物中Na₂EDTA的浓度为0.4～0.6mM，所述混合物中DNase-I的酶活力单位为90～110U/ml。

优选的，所述步骤1)酶解的条件包括：所述酶解的温度为35～42℃，所述酶解的时间为50～70min，所述酶解在振荡下进行，所述振荡的转速为90～110rpm。

优选的，所述步骤1)吹打使用的工具为过火抛光的玻璃巴斯德移液管。