[发明专利]一种检测空肠弯曲杆菌的方法

权利要求书

1.一种检测空肠弯曲杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备检测线包被空肠弯曲杆菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体的试纸条；

（2）在试纸条检测区域下方放置磁铁；

（3）金磁纳米颗粒的制备及修饰：制备Fe₃O₄@AuNPs纳米颗粒并在其表面修饰空肠弯曲杆菌抗体；

（4）脂质体的制备：采用反相蒸发法制备包埋L-半胱氨酸的生物素化的脂质体；

（5）将样品溶液与Fe₃O₄@AuNPs溶液、亲和素溶液和脂质体充分混合，室温下反应，然后滴加到试纸条层析，样品在毛细作用下在试纸条上流动，当移动到结合垫时，基于抗原抗体间的免疫反应，修饰抗体脂质体-Fe₃O₄@AuNPs将与样品中含有的空肠弯曲杆菌结合，形成脂质体-Fe₃O₄@AuNPs-抗体-目标菌复合物，加入Triton X-100破坏脂质体结构，使其空腔中负载的L-半胱氨酸释放出来，然后加入金纳米颗粒，在L-半胱氨酸存在的条件下，金纳米颗粒结合在一起，产生聚集，导致试纸条检测线出产生的红色颜色信号增强，最终，试纸条得以检测出样品中低浓度的空肠弯曲杆菌。

2.根据权利要求1所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法，其特征在于，所述的磁铁的磁场强度在20mT-500mT。

3.根据权利要求1所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法，其特征在于，所述的试纸条包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、磁性纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上，所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线；所述检测线包被空肠弯曲杆菌抗体；所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体。

4.根据权利要求3所述的一种检测空肠弯曲杆菌的方法，其特征在于，试纸条的制备方法包括以下步骤：

（1）金磁纳米颗粒的制备：合成磁性纳米颗粒Fe₃O₄，在其表面包被一层金，得到Fe₃O₄@AuNPs纳米颗粒；Fe₃O₄@AuNPs表面修饰空肠弯曲杆菌抗体；

（2）样品富集预处理：将修饰空肠弯曲杆菌抗体的Fe₃O₄@AuNPs纳米颗粒溶液加入到样品溶液中充分反应，富集样品中存在的空肠弯曲杆菌，然后在外加磁场条件下，分离出结合空肠弯曲杆菌的免疫磁性纳米颗粒，重新溶解在PBS溶液中；

（3）硝基纤维膜的处理：将空肠弯曲杆菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线，将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线，烘干，即得到处理后的硝基纤维膜；

（4）试纸条的组装：在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜，再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸,组装后裁剪为60mm长，3.8mm宽的试纸条，即得到所述检测空肠弯曲杆菌的免疫层析试纸条，将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。