[发明专利]一种用基因工程菌全细胞催化制备己二醇的方法

权利要求书

1.一种用基因工程菌全细胞催化制备己二醇的方法，其特征在于，制备步骤如下：

1）取SMO苯乙烯单加氧酶、FAD黄素还原酶、EH环氧化物水解酶三种基因工程菌全细胞催化剂或SMO苯乙烯单加氧酶、FAD黄素还原酶、GDH葡萄糖脱氢酶、EH环氧化物水解酶四种基因工程菌全细胞催化剂混合，每毫升反应体系中混合基因工程菌全细胞催化剂的用量为0.5～1.2 g；

2）用50 mM，pH6.0～7.0的PBS缓冲液或pH9.0的Tris-HCl重悬步骤1）混合菌后，加入底物正己烯反应，正己烯用量为0.5～5%，所述百分比为重量体积比；

3）反应温度为30～50℃，反应时间为8～16 h，生成己二醇，

所述SMO苯乙烯单加氧酶基因工程菌，含有如SEQ.No.1所示的核苷酸序列，所述FAD黄素还原酶基因工程菌，含有如SEQ.No.2所示的核苷酸序列，所述GDH葡萄糖脱氢酶基因工程菌，含有如SEQ.No.3所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的用基因工程菌全细胞催化制备己二醇的方法，其特征在于：所述SMO苯乙烯单加氧酶、FAD黄素还原酶、GDH葡萄糖脱氢酶、EH环氧化物水解酶四种基因工程菌全细胞催化剂的比例为1～2:1:0～1:0.1。

3.根据权利要求1或2所述用基因工程菌全细胞催化制备己二醇的方法，其特征在于：基因工程菌全细胞催化剂菌株的制备方法均为：将种子培养基37℃，200rpm过夜活化，按10%比例接种到发酵培养基，37℃、200rpm 培养至对数中期，加入诱导剂乳糖至终浓度1mM，25～30℃、180rpm 诱导培养4～6 h，离心收集菌体。

4.根据权利要求3所述的用基因工程菌全细胞催化制备己二醇的方法，其特征在于：所述种子培养基为LB培养基，配方如下：蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、NaCl 10 g/L ，NH₃·H₂O调节至pH 7.0，在121℃灭菌20 min；所述发酵培养基是TB培养基，配方如下：蛋白胨12 g/L、酵母膏24 g/L、甘油4 ml/L，定容到900 mL，同时配制100 mL 0.17 M的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾溶液，115℃灭菌20 min，灭完菌两种溶液混合后待用。