[发明专利]一种靶向CD19和干扰素增效的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明涉及嵌合抗原受体领域，公开了一种靶向CD19和干扰素增效的嵌合抗原受体及其应用，具体地，本发明公开了一种多核苷酸序列，选自：（1）：含有依次连接的抗CD19单链抗体的编码序列、人CD8铰链跨膜区的编码序列、人4‑1BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列、人P2A肽的编码序列、EGFRt基因的编码序列、人P2A肽的编码序列和人IFN全长序列；和（2）：（1）中多核苷酸序列的互补序列。本发明还公开了相关的融合蛋白、核酸构建物、逆转录病毒和基因修饰的T细胞，以及上述物质在制备治疗CD19介导的疾病的药物中的用途。

技术领域

本发明涉及嵌合抗原受体领域，尤其涉及一种包含CD19-CAR并且分泌干扰素的嵌合抗原受体及其用途。

背景技术

嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞治疗是近年来免疫医学的重大突破之一。CAR-T技术的基本原理是将肿瘤患者自身的T细胞通过基因工程化改造，使T细胞表达CAR基因，转变为可特异性攻击肿瘤的CAR-T细胞，再回输到患者体内消融肿瘤。CAR-T技术最早在1993年由以色列科学家Eshhar Zelig设计并报道，并在之后的二十多年中不断优化和完善。在抗原存在情况下，T细胞需要按照一定顺序依次接受三种信号才能完全激活，并且正常的增殖和分化。这三种信号分别是：第一信号，抗原结合的T细胞受体（TCR），和CD3胞内免疫受体酪氨酸激活基序（ITAM）转导信号（CD3ζ）；第二信号，协同刺激信号，包括CD28、CD137、CD134等表面受体；第三信号，细胞因子，例如I型干扰素、白介素12（IL-12）等。CAR-T设计考虑到了T细胞激活的免疫学特性，CAR的结构包含胞外结合区，跨膜区和胞内信号区。通常胞外区包含能够识别肿瘤相关抗原的scFv，跨膜区采用CD8、CD28 等分子的跨膜区，胞内信号区采用免疫受体酪氨酸活化基序 (ITAM) CD3ζ及共刺激信号分子 CD28、CD137、CD134 等的胞内信号区。目前市场主流的CAR设计为第二代CAR，即在CAR的胞内信号区提供T细胞激活所必须的第一信号（ITAM结构域）和第二信号（B7/CD28或 4-1BB/CD137胞内结构域），能够引起T淋巴细胞的持续增殖，提高T细胞的细胞毒性、增殖活性等。

2010年，首例B细胞淋巴瘤患者接受靶向CD19的CAR-T细胞治疗并取得了令人振奋的积极效果。此后，越来越多的研究组通过临床试验证实了CAR-T技术治疗B细胞血液肿瘤的安全性和有效性。虽然相较传统疗法，CAR-T细胞治疗在血液肿瘤领域展现出巨大的优势，但是其存在的问题仍然不容回避。例如，对有些T细胞活性较差的病人，CAR-T细胞的增殖能力较差，对肿瘤细胞的杀伤效率较低。另外，现有大多数CAR-T普遍表现出体内持续存活能力不足的缺陷，易造成肿瘤复发。而盲目加大CAR-T细胞的使用剂量，容易造成较强的毒副作用，如炎症因子风暴和中枢神经系统毒性。因此，仍然迫切需要对CAR的设计进行改造，进一步提高CAR-T细胞的活性和增殖能力。

发明内容

为了进一步提高CAR-T对B细胞淋巴瘤的杀伤效果，本发明提供了一种包含CD19-CAR-EGFRt-IFN序列的嵌合抗原受体及其用途。本发明在靶向CD19的CAR设计基础上进行改进，在CD19-CAR的C末端增加EGFRt自杀基因片段和基因优化的人全长干扰素（IFN）片段。与仅表达CD19-CAR的CAR-T细胞相比，表达CD19-CAR-EGFRt-IFN的CAR-T细胞具有更强的肿瘤杀伤能力。