[发明专利]一种评价多溴联苯醚发育毒性的方法

说明书

本发明提供了一种评价多溴联苯醚发育毒性的方法，涉及毒理学技术领域。本发明所述方法包括以下步骤：将发育正常的斑马鱼胚胎置于不同浓度的多溴联苯醚溶液中培养44～68h作为实验组，同时设置空白对照组，对比斑马鱼的胚胎色素变化；当实验组中所述胚胎色素浓度较空白对照组显著降低时，证明受到了多溴联苯醚的发育毒性。本发明所述方法以斑马鱼为试验对象进行多溴联苯醚的检测，能够快速获得大量同质性好的试验动物，降低试验成本，且容易观察中毒症状，可实时直观地观测鱼体色素变化，提高了多溴联苯醚检测的效率、直观性和准确性。

技术领域

本发明属于毒理学检测技术领域，具体涉及评价多溴联苯醚发育毒性的方法。

背景技术

多溴联苯醚(polybrominated diphenyl ethers，PBDEs)是一种环境中广泛存在的持久性有机污染物。由于其优异的阻燃性能，PBDEs被广泛用于电子设备、纺织品、塑料及建筑装潢材料中。因为PBDEs与载体之间以非化学键相连，因此在使用和处置过程中，PBDEs会从产品中通过多种途径迁移至环境介质，并可通过食物、吸入和皮肤接触进入生物体内。PBDEs具有高脂溶性，降解周期长，因此可在环境和生物体内蓄积，对生态环境及人类健康构成威胁。毒理学研究证据表明，PBDEs具有甲状腺毒性、肝脏发育毒性、神经系统毒性和生殖毒性等。尤其令人担忧的是，PBDEs被证实具有发育毒性。人群调查发现，孕妇血清和母乳中检测出PBDEs的存在，影响胎儿/儿童正常的发育过程，并具有不可逆的影响。2,2’,4,4’-四溴联苯醚(2,2′,4,4′-tetrabromodiphenyl ether,BDE-47)是最重要的PBDEs之一，在环境和人体样本中都有较高的检测水平。较其他PBDEs，BDE-47体内代谢周期长，生物蓄积性强，发育毒性也更强。

目前对BDE-47的发育毒性，科研人员多利用大鼠、小鼠作为试验对象，主要检测动物的神经行为损伤，需要相应的的行为学记录和分析系统，试验研究成本高，且动物繁殖周期长、单次产仔数低而不易获得同质试验个体，不易直观展示活体胚胎发育病理变化，因此不适于作为检测BDE-47发育毒性检测的理想方法。斑马鱼(Danio rerio)作为脊椎动物活体模型，具有体型小，繁殖周期短，饲养成本低，胚胎易获得，通体透明易于观察等优势。研究证实，斑马鱼的毒性反应结果能外推到哺乳动物及人类。因此，斑马鱼已成为化合物毒性评价的良好动物模型，并且成为各国标准化组织制定的标准试验动物。近年来，斑马鱼逐渐成为PBDEs发育毒性的试验对象，主要通过致畸作用及幼鱼神经行为功能缺陷进行评价。试验研究需要专门的斑马鱼幼鱼行为记录及分析系统，研究成本较高，且不直观。因此，迫切需要简便快速且直观的检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种评价多溴联苯醚发育毒性的方法，旨在降低多溴联苯醚检测试验成本，提高多溴联苯醚检测的效率、直观性和准确性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种评价多溴联苯醚发育毒性的方法，包括以下步骤：将斑马鱼胚胎置于0.312～1.25mg/L的多溴联苯醚溶液中培养44～68h作为实验组，同时设置空白对照组，对比斑马鱼的胚胎色素变化；当实验组中所述胚胎色素浓度较空白对照组显著降低时，证明受到了多溴联苯醚的发育毒性。

优选的，所述斑马鱼胚胎为受精后4h的斑马鱼胚胎。

优选的，所述多溴联苯醚溶液中还包括二甲基亚砜和胚胎培养液。

优选的，所述多溴联苯醚溶液中的多溴联苯醚种类包括2,2’,4,4’-四溴联苯醚。

优选的，每20mL所述多溴联苯醚溶液中培养50只所述斑马鱼胚胎。

优选的，所述培养的温度为28±0.5℃，所述培养过程中的光周期为光照14h/黑暗10h。

优选的，在所述培养过程中，每24h更换一次所述多溴联苯醚溶液。