[发明专利]人GPD2基因抑制剂及其应用

说明书

本发明公开了人GPD2基因抑制剂及其应用，具体是以人GPD2基因为目标，通过选取合适的靶基因序列，以RNA干扰的方式设计出具有高效抑制GPD2基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞特别是乳腺癌肿瘤细胞的增殖的核酸分子、重组载体以及慢病毒等抑制剂，提供了人GPD2基因在筛选肿瘤治疗药物、制备肿瘤治疗药物或制备肿瘤诊断药物中的应用，丰富了肿瘤治疗途径。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及人GPD2基因抑制剂及其应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指内源性或外源性双链RNA介导的细胞内mRNA发生特异性降解，导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型缺失。它可高效、特异地阻断体内特定基因的表达，导致其降解，从而引起生物体内特异基因的沉默，使细胞表现出某种基因表型的缺失，是近年来新兴的一种常用的研究基因功能、寻找疾病治疗方法的实验室技术。目前，RNAi特异性的抑制基因表达，已应用于基因病、病毒感染性疾病、癌症的基因治疗等方面。

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤性疾病，严重威胁妇女的生命健康。每年大约1,676,600名新的乳腺癌患者被发现，521,900名乳腺癌病人死亡，占癌症总数的25％，死亡人数占15％。与其他同类型的癌症类似，这种疾病的病因学被认为是多步骤的遗传和表观遗传的过程，包括癌基因激活和抑癌基因的失活等。正常基因突变或过表达导致乳腺癌，如HER2。建立这一亚型的分子发病机制及识别潜在的治疗靶点是提高乳腺癌的治疗效果的关键点。

GPD2(glycerol-3-phosphate dehydrogenase 2)定位于线粒体内膜，并催化甘油-3-磷酸转变为二羟丙酮磷酸。目前，GPD2与肿瘤相关研究极少，有研究发现，GPD2在前列腺癌Gleason评分GP3后GP4基质中表达差异有显著性；还有研究发现乳腺癌和癌旁GPD2免疫染色具有显著差异，癌的免疫染色显著高于癌旁；干扰GPD2的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231有抑制其增殖的作用。基于以上研究，推测GPD2的表达可能与肿瘤的发生发展有一定联系。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的一个目的是提供人GPD2基因抑制剂的应用，具体是人GPD2基因抑制剂在筛选肿瘤治疗药物、制备肿瘤治疗药物或制备肿瘤诊断药物中的应用，特别是在针对乳腺癌的肿瘤中。

本发明的另一个目的是提供一种抑制人GPD2基因的重组载体，使其以RNA干扰方式稳定并特异地下调GPD2基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞特别是乳腺癌肿瘤细胞的增殖。

本发明的另一个目的是提供一种抑制人GPD2基因的慢病毒，使其以RNA干扰方式稳定并特异地下调GPD2基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞特别是乳腺癌肿瘤细胞的增殖。

本发明的另外一个目的是提供所述重组载体和慢病毒在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用，特别是针对乳腺癌的肿瘤中。

本发明的另外一个目的是提供一种预防或治疗肿瘤的药物，使其以RNA干扰方式稳定并特异地下调GPD2基因的表达，并有效地抑制人肿瘤细胞特别是乳腺癌肿瘤细胞的增殖。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

人GPD2基因抑制剂，是以人GPD2基因中SEQ ID NO：1所示核苷酸序列为靶点设计的核酸分子，

所述核酸分子为siRNA或shRNA，其中，所述siRNA中含有能够与GPD2基因中SEQIDNO：1所示核苷酸序列杂交的核苷酸序列，所述shRNA中含有能够与GPD2基因中SEQ IDNO：1所示杂交的核苷酸序列。

所述siRNA的核苷酸序列，具体如下：以GPD2基因为模板，设计多个19-21nt RNA干扰靶点序列。经过评估，选取以下序列作为干扰靶点：TGTATTAGAGAGTATCAAT(SEQID NO：1)。