[发明专利]一株高产丙二酰辅酶A的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一株产丙二酰辅酶A的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌由敲除大肠杆菌（Escherichia coli）基因组中ldhA、pta、frdA、poxB、adhE五个基因，再导入丙二酰辅酶A合成途径基因构建而成，所述丙二酰辅酶A合成途径基因包括大肠杆菌的乙酰辅酶A合成酶基因acs，肠沙门氏菌(Salmonella enterica)的乙酰辅酶A羧化酶基因seaccACD和谷氨酸棒状杆菌（Corynebacterium glutamicum）的生物素连接酶基因cgbirA，所述肠沙门氏菌的乙酰辅酶A羧化酶基因seaccACD包括三个亚基seaccA、seaccC、seaccD。

2.如权利要求1所述的产丙二酰辅酶A的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）运用CRISPR/Cas9方法分别敲除目标菌株大肠杆菌基因组中ldhA、pta、frdA、poxB、adhE五个基因；对敲除五个基因的基因序列设计引物进行扩增、酶切、酶连、转化得到基因敲除改造后的菌株；

（2）以大肠杆菌的基因组为模板设计引物，扩增得到大肠杆菌中编码乙酰辅酶A合成酶的acs基因，将其导入步骤（1）基因敲除改造后的菌株中得到含有大肠杆菌中编码乙酰辅酶A合成酶的acs基因的菌株；

（3）以肠沙门氏菌基因组为模板设计引物，分别扩增得到肠沙门氏菌的乙酰辅酶A羧化酶的三个亚基seaccACD基因，将其导入步骤（2）含有大肠杆菌中编码乙酰辅酶A合成酶的acs基因的菌株中得到含有大肠杆菌中编码乙酰辅酶A合成酶的acs基因和肠沙门氏菌的乙酰辅酶A羧化酶基因的菌株；

（4）以谷氨酸棒状杆菌基因组为模板设计引物，扩增得到谷氨酸棒状杆菌的生物素连接酶基因cgbirA，将其导入步骤（3）含有大肠杆菌中编码乙酰辅酶A合成酶的acs基因和肠沙门氏菌的乙酰辅酶A羧化酶基因的菌株中得到产丙二酰辅酶A的基因工程菌。

3.如权利要求1所述的产丙二酰辅酶A的基因工程菌在积累丙二酰辅酶A中的应用。

4.如权利要求1所述的产丙二酰辅酶A的基因工程菌在生产黄酮类化合物中的应用。