[发明专利]一种雏鹅性别的鉴定方法

说明书

本发明涉及生物检测领域，具体公开了一种雏鹅性别的鉴定方法，包括以下步骤：S1.采集待鉴定雏鹅的血样，用ddH₂O稀释500～1000倍，得到鹅血样稀释液；S2.以雏鹅血样稀释液作为模板，用SEQ NO.1和SEQ NO.2所示序列的引物对进行PCR扩增反应，20μL的PCR扩增反应体系中包括0.5～4.0mM的Mg²⁺2.0μL；S3.琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，扩增产物条带出现455bp和300bp两个条带为母鹅，扩增产物条带仅有455bp一个条带为公鹅。本发明省略了传统抽提DNA的步骤，而且仅采用普通Taq聚合酶即可直接对血样进行PCR，不仅简化了鉴定过程，缩短了鉴定时间，而且降低了鉴定成本。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及生物的分子检测，更具体地涉及一种雏鹅性别的鉴定方法。

背景技术

由于不同性别的个体间生长速度和生长性能等存在差异，在现代养禽业中往往需要按性别分群饲养，因此需要在早期对家禽进行性别鉴定。目前传统的鹅性别鉴定主要通过外形鉴别和翻肛鉴别。在雏鹅阶段，公母鹅外形外貌差异较小，根据外形对鹅进行性别鉴定难度较大，鉴定的准确率较低。采用翻肛鉴定的方法准确率高，一般准确率可达98％-99％，但是该方法必须在雏鹅出壳后24小时内完成，超过24小时后雏鹅肛门收缩生殖突起萎缩不易观察。同时该方法对操作者技术要求高，否则对雏鹅的伤害较大且误判率增加。因此通过采取鹅羽毛、血液等，通过分子生物学手段进行性别鉴定具有重要意义。

禽类的性别决定系统为ZW型，雄性染色体为ZZ型，雌性染色体为ZW型。因此，禽类性别PCR鉴定方法基础就是要寻找W染色体上的特异基因或者序列。目前已经发现可用于性别鉴定的性连锁基因有染色体螺旋蛋白基因(chromobox helicase DNA binding gene,CHD1)、三磷酸腺苷5A1(ATP5A1)和假基因序列(EE 0.6序列)等。CHD1基因在非平胸鸟类有2个同源拷贝(CHD-W和CHD-Z)，分别与W染色体和Z染色体连锁。这两个同源拷贝的外显子序列相似，但是内含子大小却有很大差别。因此，利用该差异设计特异性引物进行PCR扩增之后，再对PCR产物进行电泳检测，雌性(ZW)会产生2条带，而雄性(ZZ)则只有1条带。该方法是通过双阳性结果来判断雌雄的，排除了假阴性的可能，结果更加可靠准确。

目前应用PCR技术对家禽和鸟类的性别进行鉴定已有较多报道，一般是先提取基因组DNA，然后再进行PCR鉴定，例如CN103468825B、CN107354219A分别公开了PCR引物用于鹅、企鹅的性别鉴定，均经过了提取DNA的过程，DNA提取比较繁琐，因此整个鉴定过程耗时较长。而以全血样品直接进行PCR简便快速，但是全血PCR的试剂盒价格较高，CN106701910A公开了一种用于鉴定鸽子性别的引物对、试剂盒及方法，该方法直接使用鸽子血液进行PCR检测，该技术方案的PCR反应体系中，Taq聚合酶选用的是Omni Klentaq，这种酶是从文库中筛选出来的具有极高耐受性的Taq或者Klentaq突变体，可以直接以全血、血清等材料为模板一步扩增目的基因，避免了繁琐的核酸DNA提取过程，但是这种酶价格昂贵，使用该酶进行雏鹅性别鉴定成本太大。因此，对于家禽养殖者，尤其是家禽养殖大户，需要一种耗时短且成本低的家禽性别鉴定方法。

发明内容

为了消除现有技术的缺陷，本发明对Taq聚合酶、血样、镁离子浓度等梯度进行反应体系优化，不仅免去了基因组DNA抽提的步骤，大大节约时间和人工成本，而且采用普通Taq聚合酶进行血样PCR，大大降低了鉴定成本。

一种雏鹅性别的鉴定方法，包括以下步骤：

S1.采集待鉴定雏鹅的血样，用ddH₂O稀释500～1000倍，得到鹅血样稀释液；

S2.以雏鹅血样稀释液作为模板，用SEQ NO.1和SEQ NO.2所示序列的引物对进行PCR扩增反应，20μL的PCR扩增反应体系中包括0.5～4.0mM的Mg²⁺2.0μL；