[发明专利]一种羊抗鼠IgG抗体的纯化工艺

说明书

本发明提供了一种羊抗鼠IgG抗体的纯化工艺，包括以下步骤：S1、分级硫酸铵沉淀，S2、免疫亲和层析柱纯化。由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：先经硫酸铵分级沉淀，去除杂蛋白，提高抗体稳定性，提高层析柱的利用率，再结合免疫亲和层析法，进一步提高了抗体的特异性，降低了实验中的本底，获得高纯度，高效价的纯抗体，满足试剂生产的需要。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域。

具体地说，是涉及一种羊抗鼠IgG抗体的纯化工艺。

背景技术

近年来，抗体在疾病的诊断、治疗和预防中的应用越来越广，随着生物技术的不断发展进步，促进了抗体的大规模生产和应用。抗体的制备方法也越来越多，通过不同方法制备的抗体往往与多种杂蛋白及其他杂质混合在一起，为了获得成分单一的高纯度抗体，或将抗体用于特定的用途，就需要对抗体进行分离纯化。

如多克隆抗体的制备、单克隆抗体的制备以及基因工程抗体的制备等。多克隆血清中含有复杂多样的抗体，它不仅含有针对免疫原产生的抗体，还有血清的全部抗体。抗体质量的高低将直接影响实验的成败，因此出于对特定的目的蛋白的需要，必须将抗原的特异性抗体分离出来。此外纯化抗体还可以降低非特异性本底，因为纯化后的抗体不仅除去了引起实验误差的杂蛋白，而且可以精确实验中产生阳性信号的抗体量，因此，纯化抗体可以作为所有免疫化学实验中降低本底的基本手段。

但是，现有技术纯化的抗体，纯度低，缺乏特异性，且稳定性差，在试剂生产使用中，常遇到不合格的情况，如特异性不好，试剂本底显色高；稳定性不好，6个月内-20℃保存，溶化后有肉眼可见的白色絮状物或沉淀，影响抗体效价，降低使用效率，致使其在工业、科学研究以及疾病的诊断和防治等方面的应用有一定的局限性。

发明内容

本发明的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种羊抗鼠IgG抗体的纯化工艺，获得高纯度，高效价，高特异性，高稳定性的抗体，降低试验中的本底。

本发明的目的是通过以下技术措施来达到的：

一种羊抗鼠IgG抗体的纯化工艺，包括以下步骤：

S1、分级硫酸铵沉淀，包括以下步骤：

S11、取羊抗鼠血清2体积份，分别加入PBS缓冲液1.8-2.2体积份和饱和硫酸铵溶液0.8-1.2体积份，充分混匀；

S12、11000-13000r/min离心18-22min，弃沉淀，除去纤维蛋白；

S13、上清中加入饱和硫酸铵溶液2.8-3.2体积份，充分混匀；

S14、11000-13000r/min离心18-22min，弃上清；

S15、沉淀中加入PBS缓冲液1.8-2.2体积份，再加入饱和硫酸铵溶液0.8-1.2体积份，充分混匀；

S16、11000-13000r/min离心18-22min，弃上清，除去白蛋白；重复步骤S15，2-3次；

S17、沉淀中加入PBS缓冲液0.8-1.2体积份，装入透析袋，放于PBS缓冲液中4℃透析24-48小时，直至无SO4^2-或NH4⁺检出为止；

S18、2800-3200r/min离心18-22min，取上清用0.22um滤器过滤，即为粗纯的抗体；

S2、免疫亲和层析柱纯化，包括以下步骤：

S21、取粗纯的抗体1体积份，加入结合缓冲液0.8-1.2体积份；充分混匀，用0.22um滤器过滤；

S22、制备免疫亲和层析柱，使用结合缓冲液冲洗；