[发明专利]一种紫花白及种苗的组培方法

权利要求书

1.一种紫花白及种苗的组培方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、授粉制种：2~4月份，待紫花白及花朵盛开时节，选择长势良好、无病害的紫花白及，人工收集花粉，并对收集到的花粉对其他无病害紫花白及进行人工授粉，授粉结束后作种子培养；

b、取种精制：同年10~11月份，收集授粉后白及生长出的成熟白及果荚，筛分，除去不饱满和空壳果荚，破开果荚，取白及种子；

同时取升汞溶液、医用酒精、蒸馏水放在无菌的超净台上吹一段时间后，再放于无菌环境中烘干备用；取白及种子置于0.2~0.5%升汞溶液中浸泡3~5min，取出沥干后置于无水乙醇中浸泡8~10min，取出沥干后再置于蒸馏水中清洗3~5次，沥干后无菌烘干，制得精制白及种备用；

c、一代组培：向组培瓶中盛放4~6cm厚的刚配置的组培基质，扒平，放在高温灭菌锅中进行高温杀菌消毒，冷却、制成无菌组培培养基；均匀撒入精制白及种，密闭组培瓶，于温度25~30℃、湿度35~45%、光照5000~8000LX的条件下无氧培育至白及种子长出芽孢，种苗长2~4cm，培育的一代白及苗；

d、二代组培：向另一组培瓶中放置4~6cm厚的刚配置的组培基质，消毒灭菌；同时剪取一代白及苗及其芽孢，控制每个芽孢上包括一根白及幼苗，除去枯黄幼苗叶，每根幼苗上仅留下一片鲜嫩的幼苗叶；选用无菌清水冲洗干净芽孢后，滤纸吸干水分，再将芽孢置于液体菌剂中浸泡15~20s，提出沥干，移植到组培瓶中，密闭组培瓶，于温度25~30℃、湿度35~50%、光照5000~8000LX的条件下培育至白及芽孢膨胀至原来的2~5倍，种苗长5~7cm，培育得二代白及苗；

e、驯化：将上述二代白及苗移植至培养基质中，移植过程中控制移植的每根白及苗包括一个芽孢，并控制芽孢上包括至少1根长有白毛的须根；同时修剪掉二代白及苗枯黄叶片，于温度20~30℃、湿度35~50%、光照5000~8000LX的条件下驯化15~30d，即得可移栽的紫花白及种苗；

其中，所述人工授粉方法如下：

在待人工授粉的紫花白及花朵刚绽放时节，选用柔软的细毛刷刷除花蕊上的花粉，套袋，待花朵完全绽放后，选用另一细毛刷蘸取收集到的花粉，人工将花粉刷涂 在待授粉的花蕊上，套袋，浇一次透根营养水，培育1~3d，去袋，培育至授粉后白及植株长出果荚；

所述透根营养水为薏仁米淘米水的500倍稀释液，还包括占稀释液总重0.9~1.5％的磷酸二氢钾、0.5~0.8%的硫酸铝；

所述种子培养方法如下：

待紫花白及人工授粉结束7d后，进行一次除草，并浅翻种植地土壤3~5cm，避免弄伤白及根茎；并选用赤霉素的4000~5000倍稀释液喷施白及植株；

所述赤霉素的稀释液中还含有占稀释液总重3~5‰的过磷酸钙、2~4‰的氮源、1~2‰的钾源；

所述组培基质为常规MS培养基与大豆蛋白、多肽、枫叶干粉末按100:7:1:2的比例混合加工制成；干枫叶粉末粒度≤0.1mm；

所述液体菌剂由下述方法制备而成：

在纯净薏仁米淘米水中，接种占淘米水总重3~5‰的植物乳杆菌、7~9‰的酵母菌、2~4‰的赤霉素、5~9％辣木叶粉，混拌均匀后于温度28~32℃、湿度40~50%的条件下无氧发酵2~4d，再于相同条件下有氧发酵3~5d，经325目筛网过滤制得。