[发明专利]一种蛋白质O-GalNAc修饰快速搜库和深度覆盖新方法

权利要求书

1.一种蛋白质O-GalNAc修饰快速搜库和深度覆盖的方法，包括如下步骤：

（A1）从O-GalNAc修饰肽段的质谱谱图中提取糖肽谱图；

（A2）根据是否含有唾液酸碎片，对步骤（A1）中所得的所述糖肽谱图进行分类，分为含有唾液酸碎片的谱图和不含有唾液酸碎片的谱图；

（A3）对所述含有唾液酸碎片的谱图进行含唾液酸O-GalNAc糖型的数据库检索，对所述不含有唾液酸碎片的谱图进行不含唾液酸O-GalNAc糖型的数据库检索；

步骤（A1）中，所述从O-GalNAc修饰肽段的质谱谱图中提取糖肽谱图是从所述O-GalNAc修饰肽段的质谱谱图中提取含有氧鎓离子碎片的谱图；

所述氧鎓离子碎片大小为126Da、138Da、168Da、186Da和204Da；

步骤（A2）中，所述唾液酸碎片大小为274Da和292Da；

所述方法还包括在多样本检测时对不同样本中缺失的O-GalNAc糖肽信息进行填充和/或定量分析的步骤，如下：先利用多样本中的已鉴定到的完整O-GalNAc糖肽的实际保留时间计算得到待补充的对应目标缺失O-GalNAc糖肽的参考保留时间；再对所述待补充的对应目标缺失O-GalNAc糖肽的参考保留时间进行校正，得到对应的校正保留时间；最后通过所述校正保留时间和质谱一级质量数进行一级质谱峰匹配和峰面积提取；

假定一组待进行蛋白质O-GalNAc修饰鉴定的样本，样本数共计X个；每个样本进行一次质谱分析；统计在至少N次质谱分析中均鉴定到的完整O-GalNAc糖肽的数据；将所述至少N次的实际次数记为n，对应n个样本；补充在另外X-n个样本中缺失的与所述n个样本中均鉴定到的完整O-GalNAc糖肽相对应的O-GalNAc糖肽的信息；

将来自于所述X-n个样本中某一样本A的某条待补充的目标缺失O-GalNAc糖肽记为O-GalNAc糖肽1；

所述样本A中所述O-GalNAc糖肽1的校正保留时间是“所述O-GalNAc糖肽1的参考保留时间”加上“在所述样本A的质谱鉴定数据中，在所述O-GalNAc糖肽1的参考保留时间前后5分钟范围内，所鉴定到的所有完整O-GalNAc糖肽的平均保留时间偏移”；

所述O-GalNAc糖肽1的参考保留时间是在所述N次质谱分析中所述O-GalNAc糖肽1的实际保留时间的中位数；

所述“在所述样本A的质谱鉴定数据中，在所述O-GalNAc糖肽1的参考保留时间前后5分钟范围内，所鉴定到的所有完整O-GalNAc糖肽的平均保留时间偏移”是在所述样本A的质谱鉴定数据中，在所述O-GalNAc糖肽1的参考保留时间前后5分钟范围内，所鉴定到的所有完整O-GalNAc糖肽的实际保留时间和参考保留时间的平均差值。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（A2）中，是使用Byonic软件并使用软件自带的O-GalNAc数据库对所述含有唾液酸碎片的谱图进行含唾液酸O-GalNAc糖型的数据库检索，对所述不含唾液酸碎片的谱图进行不含唾液酸O-GalNAc糖型的数据库检索。

3.根据权利要求1-所述的方法，其特征在于：步骤（A3）中，检索结果为含唾液酸O-GalNAc糖型的数据库检索结果和不含唾液酸O-GalNAc糖型的数据库检索合并所得。