[发明专利]赭曲霉毒素A基因敲除的赭曲霉突变菌株及其构建和应用在审
| 申请号： | 201910856888.1 | 申请日： | 2019-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN110564630A | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 李茜茜;时丽;荣绍丰;管世敏;张硕;蔡宝国;刘颖颖 | 申请（专利权）人： | 上海应用技术大学 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12N15/80;C12R1/66 |
| 代理公司： | 31001 上海申汇专利代理有限公司 | 代理人： | 王婧 |
| 地址： | 200235 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 突变菌株 赭曲霉 赭曲霉毒素A 基因敲除 合成 聚酮合酶基因 抗性标记基因 保藏 同源重组 构建 合酶 聚酮 菌株 敲除 应用 | ||
1.一种赭曲霉毒素A基因敲除的赭曲霉突变菌株，保藏编号为CCTCC NO：M2019186。
2.权利要求1所述的赭曲霉毒素A基因敲除的赭曲霉突变菌株的构建方法，其特征在于，包括：
步骤1：克隆赭曲霉聚酮合酶编码基因pks；
步骤2：克隆选择性标记抗性基因；
步骤3：构建含有pks上下游关键DNA序列p-u1、p-d1和所述的选择性标记抗性基因的融合基因，并将融合基因插入质粒构建重组质粒；
步骤4：重组质粒转化大肠杆菌DH5α，培养并筛选转化子进行重组质粒验证；
步骤5：制备赭曲霉原生质体；
步骤6：重组质粒转化赭曲霉原生质体；
步骤7：培养和筛选转化后的赭曲霉获得赭曲霉阳性转化子；
步骤8：对阳性转化子进行基因水平的验证，获得赭曲霉毒素A基因敲除的赭曲霉突变菌株。
3.如权利要求2所述的赭曲霉毒素A基因敲除的赭曲霉突变菌株的构建方法，其特征在于，所述的质粒为pSilent-Dual1、pBC-Hygro、pAg1-H3和pMD18-T中的至少一种。
4.如权利要求2所述的赭曲霉毒素A基因敲除的赭曲霉突变菌株的构建方法，其特征在于，所述的步骤4中筛选所用抗性标记为氨苄青霉素、氯霉素或卡那霉素，浓度为10-60μg/mL。
5.如权利要求2所述的赭曲霉毒素A基因敲除的赭曲霉突变菌株的构建方法，其特征在于，所述的步骤7中筛选所用抗性标记为博来霉素或潮霉素，浓度为20-150μg/mL。
6.权利要求1所述的赭曲霉毒素A基因敲除的赭曲霉突变菌株在发酵工程或生物医药工程领域中的应用。
7.权利要求1所述的赭曲霉毒素A基因敲除的赭曲霉突变菌株在制备甾体类药物中的应用。
8.一种重组质粒，其特征在于，含有pks上下游关键DNA序列p-u1、p-d1和选择性标记抗性基因的融合基因。
9.一种重组菌，其特征在于，含有权利要求8所述的重组质粒。
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