[发明专利]一种重阳木的组培快繁方法

权利要求书

1.一种重阳木的组培快繁方法，其特征在于，以重阳木带腋芽茎段或重阳木叶片为外植体进行组织培养繁育；

其中，当外植体为重阳木带腋芽茎段时，具体的培养繁育步骤如下：

A1、外植体的获得与消毒：采摘新鲜的重阳木带腋芽茎段用洗衣粉冲洗1min、流水冲洗1h，接着于超净工作台中依次使用75％酒精漂洗30s、无菌水冲洗4次、1％次氯酸钠浸泡5min，最后，再采用无菌水冲洗6次；冲洗完毕，用无菌吸水纸将叶片上的水分吸干备用；

A2、诱导培养：将吸干水分的重阳木带腋芽茎段于无菌条件下切块，并分别接种至丛生苗诱导培养基中进行丛生苗的诱导培养；其中，丛生苗诱导培养基的配方为：MS+1.8mg/L6-BA+0.5mg/L 2,4-D，pH 5.8；

A3、生根培养：将培养所得的丛生苗切为单个苗直接转接至生根培养基中进行生根培养；其中，生根培养基的配方为：1/2MS+0.3mg/L IBA，pH 5.8；

当外植体为重阳木叶片时，具体的培养繁育步骤如下：

B1、外植体的获得与消毒：

①选取颗粒饱满的重阳木种子，将其浸泡到无菌水4h，然后在超净工作台上用利用75％酒精迅速漂洗15s，重复3次，接着用4％次氯酸钠浸泡8min，最后用无菌水冲洗4次；冲洗完毕，用无菌吸水纸将种子上的水分吸干备用；

②将吸干水分的重阳木种子于无菌条件下接种至无菌叶片培养基中进行无菌叶片的培养，培养所得的重阳木无菌叶片即为目标所需的外植体重阳木叶片；其中，无菌叶片培养基的配方为：1/2MS，pH 5.8；

B2、愈伤组织诱导：将获得的重阳木无菌叶片于无菌条件下接种至愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织的诱导培养；其中，愈伤组织诱导培养基的配方为：MS+1.6mg/L 6-BA+1mg/L 2,4-D，pH 5.8；

B3、愈伤组织分化：挑选愈伤组织，将其接种至分化培养基中进行愈伤组织分化培养；其中，分化培养基的配方为：MS+1.6mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D，pH 5.8；

B4、生根培养：选取出苗一致的芽苗，切除其基部的愈伤组织，将丛生芽基部的愈伤组织切除，分割为单个芽，再将单个芽转接至生根培养基中培养，其中，生根培养基的配方为：1/2MS+0.3mg/L IBA，pH 5.8。

2.根据权利要求1所述的重阳木的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤A2中，将吸干水分的重阳木带腋芽茎段于无菌条件下切成1cm²大小的切块，并分别接种至含丛生苗诱导培养基的培养瓶中进行丛生苗的诱导培养，每个培养瓶中接种1块茎段。

3.根据权利要求1所述的重阳木的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤A2和步骤A3中，诱导培养与生根培养的具体培养条件为：培养温度(25±1)℃，光照时间14-16h/d，光照强度1500-2000Lx。

4.根据权利要求1所述的重阳木的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤A2中，培养至15d时，开始出现丛生苗，出苗率达83.3％。

5.根据权利要求1所述的重阳木的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤A3中，待丛生苗长至2cm高，将其切为单个苗转移到生根培养基中培养，7天后，开始出根，生根率100％。

6.根据权利要求1所述的重阳木的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤B1中，将吸干水分的重阳木种子于无菌条件下接种至含无菌叶片培养基的培养瓶中进行无菌叶片的培养，每瓶接种3粒种子，3周后观察，共接60瓶，重复三次试验，并统计重阳木种子的发芽率及污染率。

7.根据权利要求1所述的重阳木的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤B1、步骤B2、步骤B3和步骤B4中，具体的培养条件为：培养温度(25±1)℃，光照时间14-16h/d，光照强度1500-2000Lx。

8.根据权利要求1-7任一所述的重阳木的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤A3与步骤B4后还分别包括“试管苗的炼苗移栽”步骤：

通过逐步开盖的方式将步骤A3或步骤B4获得的试管苗放置在组培室内驯化一周，并将无菌水倒入相应培养瓶中以保持水分；一周过后，将试管苗取出，并将附着在试管苗根部的培养基清洗干净，接着将其移栽于灭菌处理好的培养基质中；放其置于室内，浇透水，并用塑料薄膜覆盖在其周围，定期浇水，并保证一周后减少浇水次数；4d后将塑料薄膜移开至完全拆除，7d后移出培养室，使其于自然光下进行生长；其中，所述培养基质的具体组成为黑土：珍珠岩＝1:3。