[发明专利]一种植物基因组DNA的提取方法及其应用

权利要求书

1.一种植物基因组DNA的提取方法，其特征在于，在利用CTAB裂解液裂解植物细胞后，室温放置3~5min后低温离心收集上清；在收集的上清中加入抽提剂进行抽提，经沉淀获得基因组DNA；

所述CTAB裂解液的添加量为使得裂解体系中CTAB的质量体积比g：ml为1.8~2.2%，PVP40的质量体积比g：ml为1.8~2.2%，Tris-HCl的浓度为90~110mM，EDTA的浓度为22.5~27.5mM，D-Sorbitol的浓度为315~385mM，NaCl的浓度为1.8~2.2M，无水亚硫酸钠的浓度为90~110mM，β-巯基乙醇的体积百分比为1.5~3%；

所述抽提剂包含SDS和EDTA；

所述抽提剂的添加量为使得抽提体系中SDS的质量体积比g：ml为0.9~1.1%，EDTA的浓度为4~6mM；

所述抽提为在-15~-20℃放置5~10min后，低温离心收集下层溶液。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述裂解为在60~65℃处理30~50min。

3.根据权利要求1~2任一项所述的提取方法，其特征在于，所述沉淀为采用异丙醇沉淀。

4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述异丙醇沉淀为加入醋酸钠和异丙醇在-20℃放置20~30min。

5.根据权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述醋酸钠的添加量为使得其在沉淀体系中的浓度为150~200mM；所述异丙醇的添加量为沉淀体系总体积的35~40%。

6.根据权利要求1~2任一项所述的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）在液氮中充分研磨植物组织，得到植物组织粉末；

（2）在步骤（1）的植物组织粉末中加入所述CTAB裂解液至裂解体系中CTAB的质量体积比g：ml为1.8~2%，PVP40的质量体积比g：ml为1.8~2%，Tris-HCl的浓度为90~100mM，EDTA的浓度为22.5~25mM，D-Sorbitol的浓度为315~350mM，NaCl的浓度为1.8~2M，无水亚硫酸钠的浓度为90~100 mM，β-巯基乙醇的体积百分比为1.5~2%，于65℃处理30~50min；

（3）室温放置3~5min后低温离心收集上清；在收集的上清中加入所述抽提剂，于-20℃放置5~10min进行抽提；所述抽提剂的添加量为使得抽提体系中SDS的质量体积比g：ml为0.9~1%，EDTA的浓度为4~5mM；

（4）低温离心，收集下层溶液；在收集的下层溶液中加入醋酸钠和异丙醇，于-20℃沉淀20~30min；所述醋酸钠的添加量为使得其在沉淀体系中的浓度为150~200mM；所述异丙醇的添加量为沉淀体系总体积的35~40%；

（5）低温离心弃去上清后，采用乙醇洗涤沉淀2次，干燥、溶解基因组DNA，加入RNA酶去除RNA。

7.权利要求1~6任一项所述的植物基因组DNA的提取方法在植物基因组测序文库构建中的应用。