[发明专利]一种利用rs9934438检测华法药效的试剂盒

说明书

本发明公开了一种利用rs9934438检测华法药效的试剂盒；所述试剂盒包括MassARRAY芯片、检测基因VKORC1rs9934438SNP位点三条引物分别称为正向引物，反向引物以及延伸引物，其序列依次分别如SEQ ID No.1～3，其中引物是用于鉴别华法林药效和不良反应相关基因的多态性位点。本发明的试剂盒可对上述位点进行高通量检测，具有灵敏度高、特异性高、检测结果稳定、可靠性高等优点；同时，适用于临床疾病突变检测，药物基因组学分析、法医学鉴定等基因分析领域。

技术领域

本发明属于基因技术领域，涉及一种利用rs9934438检测华法药效的试剂盒。

背景技术

华法林是双香豆素衍生物，化学结构为3-(a-苯基丙酮)-4-羟基香豆素。华法林作为一种香豆素类口服抗凝药，用于预防及治疗深静脉血栓及肺栓塞；预防心肌梗塞后血栓栓塞并发症(卒中或体循环栓塞)；预防房颤、心膜瓣疾病或人工膜瓣置换术后引起的血栓栓塞并发症，其排出方式主要经过肾脏；然而在肝脏中，维生素K参与华法林代谢通路。体内未活化的维生素K依赖性凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ和蛋白C、S、Z只有经γ-谷氨酰基羧化酶(GGCX)进行γ-羧化后才具有活性，进而发生级联反应引起血液凝固。还原型维生素K是GGCX必需的辅助因子，因此体内还原型维生素K含量直接影响GGCX作用，维生素K环氧化物还原酶亚基1(VKORC1)将氧化型维生素K还原为还原型维生素K，华法林通过抑制VKORC1，抑制还原型维生素K生成，从而发挥抗凝作用。VKORC1基因突变类型对华法林药效作用的敏感性以及药物不良反应的耐药性可以解释个体的药物反应特异性和差异性，由此对华法林用药研究产生重要的影响。大量临床研究表明华法林具有适应症范围大，价格低廉的优势，但同时治疗窗窄导致的个体间差异大的缺陷的解决也是当今社会研究的热点。由于个体间对药物敏感性的不同，对药物剂量的需求不同，临床医生通常根据个人经验和患者临床表型调整药物剂量，这明显是不合理的，所以这也成为华法林用药过程遇到的难题：以最佳药效剂量为基线，给定剂量少，达不到抗凝血治疗效果造成血栓，而给定剂量多又会因过度抗凝血引发严重的出血事件。

维生素K环氧化物还原酶复合体1(vitamin K epoxide reductase complexsubunit 1，VKORC1)位于染色体16P11.2，约4.5kb。研究发现，VKORC1基因缺损型患者常有血栓疾病，还发现该基因功能性的变异是华法林产生耐药性和影响华法林剂量差异的关键原因，它的基因多态性能解释剂量差异的20％-30％。对现有文献的检索，在中国人群中并未发现VKORC1rs9934438SNP位点作为华法林药效分子标记的相关报道，研究结果的应用是通过对VKORC1基因多态性的检测，可以更好的了解患者对抗血小板药物的治疗效果。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种利用rs9934438检测华法药效的试剂盒。具体而言是利用多重PCR技术、单碱基延伸技术和质谱技术，对华法林药物疗效和不良反应相关的VKORC1基因rs9934438多态性位点进行检测的方法及相应的试剂盒。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

第一方面，本发明涉及一种用于华法林个体化用药相关基因SNP检测的引物组，包括：检测外周血DNA中VKORC1rs9934438SNP位点的序列如SEQ ID No:1、SEQ ID No:2示的PCR引物，以及序列如SEQ ID No:3所示的延伸引物。

第二方面，本发明涉及一种用于华法林个体化用药相关基因SNP检测的试剂盒，包括前述的引物组。

作为本发明的试剂盒的一个实施方案，所述试剂盒还包括检测试剂、检测芯片以及检测载体。

所述检测试剂包括PCR混合反应液、SAP酶mix反应液和UEP延伸mix反应液。

作为本发明的试剂盒的一个实施方案，所述试剂盒还包括纯化用树脂、点样以及质谱检测用靶片和人基因组DNA提取试剂。