[发明专利]基因缺失的减毒伪狂犬病病毒及其作为疫苗的应用

说明书

本发明涉及可作为疫苗的基因缺失减毒伪狂犬病毒及疫苗以及构建方法，具体提供了一种减毒伪狂犬病病毒(PRV)，其Us区域的Us3基因全部或部分的缺失。经实验表明所述毒株在犬、水貂、狐狸及貉子等皮毛动物上对亲本PRV毒性病毒攻击具有100％保护的诱导，该减毒PRV毒株可作为安全和有效的防控皮毛动物的伪狂犬病(PR)疫情的疫苗，具有极大的社会价值。

技术领域

本发明涉及减毒的伪狂犬病病毒，及此类病毒用于治疗和/或预防家畜及野生动物的急性传染病，还涉及减毒的伪狂犬病病毒疫苗。

背景技术

伪狂犬病(PR，Pseudorabies)是由伪狂犬病毒(PRV,Pseudorabies virus) 引起的一种急性、高致病性传染病，以发热、奇痒、脑脊髓炎、呼吸和神经系统障碍为主要特征。除自然宿主猪外，牛、羊、犬、貂、兔子、獾、貉、北极熊等多种家养动物和野生动物均对该病原易感。自2010年以来，PR疫情波及了欧洲、美国和我国等多个地区、国家，并呈现蔓延趋势，2011年至2015年期间先后波及了我国的22个省市，病毒可能出现毒力反强或者变异，导致经典的商品化疫苗对流行的强毒感染的动物无法提供有效的保护。

CN10580292A公开了一种表达猪瘟病毒E2蛋白的重组伪狂犬病病毒变异株，该毒株缺失gE、gI及TK三个基因；CN105343877A公开了一种5基因缺失的伪狂犬病重组病毒活疫苗，其中同时缺失了gE基因、gI基因、US9基因、TK基因和部分UL49.5基因；CN104862286A公开了一种猪伪狂犬病病毒基因缺失株，其中

该毒株的gI、gE、11K/28K蛋白失活；CN105018433A公开了一种猪伪狂犬病毒弱毒株，该毒株是不能表达TK、gE、gI蛋白的猪伪狂犬并毒株；CN107129999A 公开了一种利用稳转CRISPR/Cas9系统对病毒基因组进行靶向编辑的方法，其中 GE和TK基因被修饰；CN106282128A公开了一种猪伪狂犬病病毒基因缺失弱毒株，该毒株的UL区的TK基因、US区的gI gE Us9 Us2等片段缺失；CN101186902A公开了伪狂犬病病毒SA215和伪狂犬病毒多基因缺失疫苗，其缺失部分为TK gI、28K 基因序列和全部的gE、11k基因序列。这些基因缺失毒株主要是针对来自自然宿主猪的病毒。从这些研究中发现，即使是采用相同的毒力基因缺失策略，不同基因型的致弱效果差别很大。

近几年，由于病毒变异致使其宿主适应范围更广，水貂、狐狸和貉子等毛皮动物大面积暴发PR疫情的报道逐年增加，发病迅速、致死率高达80％。致使皮毛动物产业受到较大影响，目前我国市场尚无专门用于毛皮动物防控PR的疫苗，偶有养殖单位使用猪PR疫苗来防控疫情的发生流行，但由于新病毒株的毒力改变以及疫苗对毛皮动物安全性不明确，疫苗使用的效果并不理想。

因此研制相关疫苗十分迫切，尤其要注意安全性和有效性指标。

发明内容

针对已有伪狂犬病病毒疫苗对犬、水貂、狐狸及貉子等皮毛动物的免疫力低下，安全性不明确，使用效果不理想等情况，本发明在分析本实验室分离到的多株PRV流行毒株的生物学特性的基础上，发现PRV病毒基因组Us区域的Us3基因的缺失导致毒性病毒的减毒以及在犬、水貂、狐狸及貉子等皮毛动物上对亲本 PRV毒性病毒攻击的100％保护的诱导。

因此，在第一方面，本发明提供了一种减毒伪狂犬病病毒(PRV)，其缺乏以下基因的功能性形式：

在伪狂犬病毒(PRV)基因组上的基因组位置118520至119524基因位点全部或部分缺失，其相应的DNA序列为PRV 118520-119524-SEQ ID NO.1，称为Us3 基因，进一步可表述为Us区域的Us3基因全部或部分的缺失；

进一步优选包括Us区域的其他基因的全部或部分缺失，如Us2、Us9的基因全部或部分缺失；更进一步优选包括gE、gI、和/或TK基因的全部或部分缺失。