[发明专利]一种冰菜组织快速繁育的方法

权利要求书

1.一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）愈伤组织培养；2）不定芽分化；3）继代扩繁；4）生根壮苗；5）移栽；

其中，愈伤组织培养基包括：MS+6-BA 1.0-2.0mg/L+NAA 0.15-0.5mg/L；不定芽分化培养基包括：MS+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.3mg/L；继代扩繁诱导培养基包括：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1mg/L；生根壮苗培养基包括：MS+NAA 0.01mg/L+IBA 0.02mg/L。

2.根据权利要求1所述的一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

1）愈伤组织培养：从无菌苗上切取无叶脉无茎段的叶肉组织1-2cm，接种至愈伤组织培养基上进行愈伤组织的诱导，培养45天时，培养基表面生长出90%的愈伤组织；

2）不定芽分化：将步骤1）得到的愈伤组织转入不定芽分化培养基中，诱导不定芽的产生，诱导培养35天；

3）继代扩繁：将步骤2）得到的不定芽切取其翠绿的叶片，接种到诱导培养基上，培养60天，得到增殖不定芽丛；

4）生根壮苗：将步骤3）中得到的增殖不定芽丛分割成单株后转接至生根壮苗培养基上培养，培养35-40天，得到组培苗；

5）移栽：将步骤4）中得到的组培苗转移到温室中进行炼苗培养，之后将组培苗取出，根系附着的培养基用水冲洗干净，待水分自然晾干后将其移栽至培养基质中。

3.根据权利要求2所述的一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：步骤1）中，无菌苗的培养包括以下步骤：

a.制备1/2的MS培养基，加入质量分数为32%的琼脂，待全部溶解后，培养基经高温灭菌待用；

b.将种子放入真空泵用10%的次氯酸钠溶液浸泡1min,处理3次，每次10-15s；然后将用无菌水在真空泵中冲洗3-4次；

c.将灭菌的种子放入培养基上，封口培养；培养条件：温度( 23±2)℃，光照强度1500lux，每天光照14 h/d；待长出3片真叶，且叶片长度5-6cm，获得无菌苗。

4.根据权利要求2所述的一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：步骤1）中，愈伤组织培养条件：接种后黑暗处理48h；温度( 25±2)℃，光照强度1500lux，光照时间24h/d。

5.根据权利要求2所述的一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：步骤2）中，不定芽分化培养条件：温度( 25±2)℃，光照强度1500-2000lux，光照时间12 h/d；温度(18±2)℃，光照强度0 lux，黑暗时间12 h/d。

6.根据权利要求2所述的一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：步骤3）中，继代扩繁诱导培养条件：接种后黑暗处理48h，温度为25℃；温度( 25±2)℃，光照强度1500-2000lux，光照时间15 h/d；温度(18±2)℃，光照强度0 lux，黑暗时间9h/d。

7.根据权利要求2所述的一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：步骤4）中，生根壮苗培养条件：温度( 25±2)℃，光照强度2000lux，光照时间13 h/d；温度(18±2)℃，光照强度0 lux，黑暗时间11h/d。

8.根据权利要求2所述的一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：步骤5）中，炼苗培养期间，利用遮阳网逐步揭网进行日光照，盖盖子炼苗7天左右，打开培养瓶20%的盖子进行炼苗2天，打开培养瓶盖子50%进行炼苗2天，打开培养瓶盖子70%进行炼苗2天后，将组培苗置于保持阴凉通风的拱棚内，完全揭开盖炼苗23天；炼苗期间适当喷水，提高组培苗的适应能力。

9.根据权利要求2或8任一项所述的一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：步骤5）中，培养基质包括珍珠岩、泥炭和河沙，三者重量比为1：1.5：2；培养基质在100℃烘箱中烘30min进行高温灭菌，冷却后用装入苗盆中用水浇透。

10.根据权利要求1-9任一项所述的一种冰菜组织快速繁育的方法，其特征在于：组培苗移栽完毕后，将装有培养基的苗盆放入塑料棚中，每天采用喷雾洒水，保持一定的湿度，温度在25-30℃；10-12天后，使移栽苗接受充足的光照，并且正常浇水施肥。