[发明专利]一种菩提树的快速繁殖方法

权利要求书

1.一种菩提树的快速繁殖方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)消毒灭菌：在生长季节，选取当年新萌发的叶片做为外植体，先用自来水冲洗1h，在超净工作台用70％酒精浸泡30s，再用0.1％氯化汞溶液浸泡消毒2min，用无菌水冲洗4次，得到无菌外植体；

(2)初代培养：将灭菌后的叶片用无菌刀切成0.8cm×0.8cm的切块，将处理后的叶片接种在叶片诱导丛生芽培养基MS1，接种18-22d后形成愈伤组织，38-42天长成小嫩芽；

(3)继代培养：在分生苗长至0.8-1.5cm时，转接至继代增殖培养基MS2中，20-30d可继代转接一次，菩提组培苗分化率高，增殖系数可达10以上，获得大量组培苗；

(4)生根培养：在分生苗长至0.8-1.5cm时，转接至生根培养基MS3上诱导生根，培养18-22d，生根率达到95％，平均每株苗生根45条；

(5)移栽：生根苗长到5-7cm高时，移出培养室，把瓶盖揭开，喷施800倍百菌清杀菌剂，盖上薄膜驯化1-2d后，取出生根苗，小心洗去根部培养基，用杀菌剂和生根液分别进行处理，移栽到8:2的草炭土和珍珠岩中，喷施800倍代森锰锌杀菌剂，罩上塑料薄膜保湿培养，搭上遮阴网，7d喷1次水，30d后苗的成活率达90％以上。

2.根据权利要求1所述一种菩提树的快速繁殖方法，其特征在于，步骤(2)所述叶片诱导丛生芽培养基MS1为6-苄氨基腺嘌呤1.0mg/L、α-萘乙酸0.1mg/L、聚乙烯比咯烷酮0.1％、蔗糖30g/L、琼脂7g/L、用1mol/L的NaOH或HCl调节培养基pH至5.8～6.8，每日光照12h，光照强度1500-2000lx，培养温度25±2℃。

3.根据权利要求2所述一种菩提树的快速繁殖方法，其特征在于，所述叶片诱导丛生芽培养基中还包括菩提树提取物2g/L，所述菩提树提取物的提取方法为：取菩提树叶粉碎，过30-60目筛，装入超临界萃取釜，设置萃取釜压力为40-60MPa，温度为55-65℃；分离釜I的温度为45-60℃；分离釜II的温度为35-45℃，CO₂流量为15-20L/h；添加夹带剂乙醇10-12wt％；萃取2-4小时，收集萃取液，蒸干，制成。

4.根据权利要求2所述一种菩提树的快速繁殖方法，其特征在于，所述叶片诱导丛生芽培养基中还包括千屈菜提取物2g/L，所述千屈菜提取物的提取方法为：取千屈菜茎叶粉碎，过30-55目筛，装入超临界萃取釜，设置萃取釜压力为40-60MPa，温度为55-70℃；分离釜I的温度为45-65℃；分离釜II的温度为35-48℃，CO₂流量为15-18L/h；添加夹带剂乙醇10-15wt％；萃取2-4小时，收集萃取液，蒸干，制成。

5.根据权利要求1所述一种菩提树的快速繁殖方法，其特征在于，步骤(3)所述继代增殖培养基MS2为6-苄氨基腺嘌呤2.0mg/L、α-萘乙酸0.1mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7g/L，用1mol/L的NaOH或HCl调节培养基pH至5.8～6.8，每日光照12h，光照强度1500～2000lx，培养温度25±2℃。

6.根据权利要求1所述一种菩提树的快速繁殖方法，其特征在于，步骤(4)所述生根培养基MS3为吲哚丁酸1.0mg/L、噻苯隆0.002mg/L、赤霉素0.1mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7g/L，用1mol/L的NaOH或HCl调节培养基pH至5.8～6.8，每日光照12h，光照强度1500～2000lx，培养温度25±2℃。

7.根据权利要求1所述一种菩提树的快速繁殖方法，其特征在于，步骤(5)所述生根液为200ppm生根粉溶液。