[发明专利]一种氨基磁性纳米粒子的制备方法及其在DNA提取中的应用

权利要求书

1.一种氨基磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）Fe ₃O ₄磁性纳米颗粒的制备：先使用氮气对去离子水进行脱气处理20-40min，除去溶剂中溶解的氧；然后，加入FeSO ₄·7H ₂O和FeCl ₃·6H ₂O，以400-500rpm的搅拌转速进行磁力加热搅拌，温度逐渐升至70-90℃，以确保反应体系中的盐成分完全溶解；随后，将NaOH溶液缓慢加到铁盐混合物中，并同时提高搅拌速率至800-1000rpm，在pH为12下，溶液逐渐变为黑色，继续保持20-40min以确保反应完全；最后，用磁铁进行固液分离，除去体系中没有磁性的部分，得到黑褐色有磁性的固体，再用蒸馏水洗涤数次至中性，再用磁铁进行分离，即得到Fe ₃O ₄磁性纳米颗粒MNPs，将其分散在蒸馏水中得到MNPs分散液；

（2）酒石酸氢钠包裹的Fe ₃O ₄磁性纳米颗粒的制备：向烧杯中加入蒸馏水和酒石酸氢钠，搅拌溶解后，加入步骤（1）中制备的MNPs分散液，超声3-5小时，而后使用磁铁进行固液分离，除去体系中没有磁性的部分，再用蒸馏水洗涤至中性，最后用蒸馏水重悬，即得到酒石酸氢钠包裹的Fe ₃O ₄磁性纳米颗粒SHT-MNPs；

（3）乙二胺修饰的酒石酸氢钠包裹的Fe ₃O ₄磁性纳米颗粒的制备：取上述步骤（2）制备的SHT-MNPs，加入催化剂4-二甲氨基吡啶和反应物乙二胺，40-50℃恒温水浴加热3-5h，使用磁铁进行固液分离，除去体系中没有磁性的部分，再用蒸馏水洗涤至中性，除去催化剂和未反应的乙二胺，最后加入一定量的蒸馏水重悬，得到产物乙二胺修饰的酒石酸氢钠包裹的Fe ₃O ₄纳米颗粒EDA-SHT-MNPs，即氨基磁性纳米粒子。

2.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤（1）中加入的FeSO ₄·7H ₂O和FeCl ₃·6H ₂O的Fe²⁺和Fe³⁺离子的比例为2：1。

3.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，步骤（1）中加入的NaOH溶液浓度为1mol/L。

4.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述MNPs分散液中MNPs的浓度为4.8mg/mL。

5.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述氨基磁性纳米粒子表面带有氨基且带正电荷。

6.根据权利要求1所述的氨基磁性纳米粒子在细菌质粒DNA和哺乳动物基因组DNA的提取和纯化中的应用。

7.根据权利要求6所述的氨基磁性纳米粒子提取纯化细菌质粒DNA和哺乳动物基因组DNA的方法，其特征在于，具体操作步骤如下：

S1、裂解：a、细菌样品裂解液制备：取培养过夜的菌液，离心弃上清；细菌沉淀中加入碱裂解液Ⅰ充分重悬菌体，再加入碱裂解液Ⅱ，温和翻转4-6次，直到形成透亮溶液，最后加入碱裂解液Ⅲ，温和翻转混合6-8次，离心机12000×g离心10min，留上清，得到细菌样品裂解液；b、哺乳动物样品裂解液制备：于细胞沉淀中加入裂解液，50℃消化过夜，直至消化完全，得到哺乳动物样品裂解液；

S2、结合：先将EDA-SHT-MNPs重悬于结合缓冲液中，分别加入上述步骤S1所述样品裂解液，室温结合4-6min，磁分离，弃上清，用70-80％乙醇清洗两次，稍晾干；

S3、洗脱：用TE缓冲液将DNA从磁性粒子上洗脱下来，60-70℃温育5-10min，磁分离后上清即为所提取DNA。