[发明专利]一种制备食药用真菌原生质体的方法

权利要求书

1.一种制备真菌原生质体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）活化培养真菌；

（2）配置发酵培养基，向发酵培养基中添加0.1~0.8 g/L的苯丙氨酸，将活化后的真菌菌丝体接入到发酵培养基中进行静置培养3-5 d，静置培养的温度为25~33℃；每一升发酵培养基含有葡萄糖20~30 g，胰蛋白胨8~10 g，酵母粉5~8 g，磷酸二氢钾0.5~1.5 g，七水硫酸镁0.5~1.5 g，维生素B₁ 0.05~0.15 g；

（3）收集步骤（2）静置培养得到的菌丝体，分别用水、0.6 M甘露醇溶液对菌体进行洗涤，然后向菌丝体中添加0.2g蜗牛酶/ 3g菌丝体与0.1g 溶壁酶/ 3g菌丝体，利用蜗牛酶与溶壁酶对菌丝体进行酶解，酶解时间为1.5~2.5h，酶解结束后，将酶解液进行过滤以除去未被酶解的菌丝，从滤液中收集得到原生质体。

2.根据权利要求1所述的一种制备真菌原生质体的方法，其特征在于，步骤（1）活化培养真菌时，采用下述步骤：取真菌菌块，接种到种子培养基中，在25~33℃、150~200 r·min^-1振荡条件下培养6~8 d。

3.根据权利要求1所述的一种制备真菌原生质体的方法，其特征在于，静置培养过程中间歇手动摇动培养基。

4.根据权利要求1~3任一所述的一种制备真菌原生质体的方法，其特征在于，所述真菌为食药用真菌，包括但不限于灵芝（Ganoderma lucidum）、阿魏蘑（Pleurotus ferulae）、秀珍菇（Pleurotusgeesteranus）、灰树花（Griflolafrondosa）及其常见的生物分类学上亲缘关系相近或性状相近的食药用真菌。