[发明专利]胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ的联合检测方法在审
| 申请号： | 201910866297.2 | 申请日： | 2019-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN110596393A | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 唐静;崔丛丛;董文霞;周义正 | 申请（专利权）人： | 宁波奥丞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/577 | 分类号： | G01N33/577;G01N33/573;G01N33/558 |
| 代理公司： | 11616 北京盛凡智荣知识产权代理有限公司 | 代理人： | 任娜娜 |
| 地址： | 315000 浙江省宁*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胃蛋白 酶原 免疫层析试纸条 荧光免疫层析 样品稀释液 蛋白酶原 抗体包被 联合检测 浓度样品 双抗夹心 样品检测 灵敏度 血清 检测 胃镜 和胃 加样 血浆 制备 射线 组装 | ||
1.胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ的联合检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)免疫层析试纸条组装：将样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫依次搭接并粘贴固定在底板上，反应膜上远离结合垫的一端设置有控制线，在控制线和结合垫之间还设置有检测线I、检测线II；
(2)抗体包被：将荧光乳胶标记的胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体、荧光乳胶标记的胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体和鼠抗兔IgG涂覆于结合垫上，将胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体、胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体和兔IgG分别包被在层析试纸的检测线1、检测线2和控制线上；
(3)样品稀释液制备：样品稀释液为含有牛血清白蛋白、蛋白保护剂、表面活性剂和防腐剂的缓冲液；
(4)样品检测：将血清样品与样品稀释液混合均匀后，滴加至样品垫上进行免疫层析反应，随后在荧光检测仪下进行荧光检测。
2.如权利要求1所述的胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ的联合检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，底板的厚度为0.2-0.5mm，长度为5-7cm，宽度为2-4mm。
3.如权利要求1所述的胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ的联合检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，检测线II位于检测线I和控制线之间。
4.如权利要求1所述的胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ的联合检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，荧光乳胶标记的胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体、荧光乳胶标记的胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体和鼠抗兔IgG的浓度均为0.4mg/ml，将胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体、胃蛋白酶原Ⅱ单克隆抗体和兔IgG的浓度均为0.8mg/ml。
5.如权利要求1所述的胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ的联合检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，缓冲液为PBS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液中的一种，表面活性剂为吐温20、曲拉通X-100、聚乙二醇中的一种，所述防腐剂为叠氮钠或proclin，蛋白保护剂为甘露醇或甘氨酸。
6.如权利要求1所述的胃蛋白酶原Ⅰ和胃蛋白酶原Ⅱ的联合检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，缓冲液为PBS缓冲液，表面活性剂为Tween-20，所述防腐剂为叠氮钠，蛋白保护剂为甘氨酸。
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