[发明专利]一种人体血清叶酸的测定方法

说明书

本发明公开了一种人体血清叶酸的测定方法，包括实验用水的制备、叶酸标准液配制、鼠李糖乳杆菌生长培养基配制、鼠李糖乳杆菌的制备、检测培养基配制、血清叶酸检测；本发明采用活性炭吸附水中的有机杂质，可以达到消除干扰的目的；叶酸的化学性质不稳定，容易被氧化，在生长和检测培养基中添加抗坏血酸作为抗氧化剂，使溶血液中的氧分尽量降低，从而增加脱氧血红蛋白的含量，达到保护叶酸的作用；检测时细胞培养板用封口膜封闭，有助于鼠李糖乳杆菌的生长，也能防止水分蒸发和叶酸的氧化；本发明简便易行、价格低廉、且灵敏度高，更适合大规模人群的叶酸筛查需要。

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，具体涉及一种人体血清叶酸的测定方法。

背景技术

叶酸是机体所需要的重要营养素，属于水溶性维生素，参与体内氨基酸、嘌呤、嘧啶的合成。最早，叶酸在临床上主要用于治疗和预防巨幼细胞性贫血、预防胚胎神经管畸形。目前，临床上常用的叶酸检测样本主要是血清叶酸检测和红细胞叶酸检测2种。血清叶酸水平是反映近期叶酸摄入量的指标，临床上也可将其用于具有细胞贫血的病因诊断。红细胞叶酸最能反映叶酸的长期储存情况，红细胞叶酸偏低，则提示叶酸长期缺乏。

测量人体内叶酸水平的检测方法主要有:微生物法、化学发光测定法、同位素放射免疫法、气相色谱-质谱法、聚合酶链-限制性片段长度多态性测定法、离子捕获法以及最新被提出的叶酸衍生物的质谱法，其中化学发光测定法是在临床上使用最为广泛的一种方法。高效液相色谱法的特点是测定结果准确、操作简便、省时省力、分析速度快、分离效果好，是近年来发展速度较快的测定叶酸的方法，分析操作方法和所用药品分析相似，适合检测纯品，但分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵。化学发光法采用竞争结合受体测定的基本原理，将叶酸结合蛋白作为免疫反应的基础。该方法具有快捷、简便的特点，该方法易于实现自动化、结果重复性较好，可同时用于血清和红细胞叶酸测定，对血清叶酸的测定无需前期处理，对于红细胞叶酸的测定，需要在测定之前对全血样本进行处理，使红细胞溶解，同时将红细胞中的多谷氨酸叶酸转变为单谷氨酸形式。但是需要昂贵的精密仪器和试剂，样品处理过程较为复杂；另外，酶联免疫法检测结果与实际数值出入较大。而微生物法可灵敏地检测出具有生物活性的叶酸，这是微生物法区别于其他方法的最大特点及优势，但传统微生物法也存在一些缺陷：比如叶酸容易被氧化、检测时背景较高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人体血清叶酸的测定方法，提高叶酸检测的准确性，同时降低检测成本。

为实现上述目的，本发明的技术方案提供一种人体血清叶酸的测定方法，包括如下步骤：

(1)实验用水的制备：1L去离子水中加入4g活性炭粉末，搅拌30s，G4砂芯漏斗抽滤去除活性炭粉末，得到实验用水；

(2)叶酸标准液配制：称取200mg叶酸标准品，用0.01mol/L氨水溶解并定容至1L，吸取1mL上述溶液，再用0.01mol/L氨水溶解并定容至1L，再吸取1mL，用0.01mol/L氨水溶解并定容至25mL；用0.01mol/L氨水调零，比色杯光径1cm，比色波长256nm，根据紫外吸光度值，计算该溶液的叶酸浓度，然后根据实际测定浓度，用0.5％抗坏血酸钠溶液将其分别稀释为0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5和0.6ug/L共7种标准溶液；

(3)鼠李糖乳杆菌生长培养基配制：称取4.7g叶酸培养基干粉、抗坏血酸钠0.05g、氯霉素0.02g、硫酸锰0.01g放入200mL烧杯中，加100uL待标定的叶酸标准溶液(浓度200ug/L)和100mL实验用水，混匀后加热至沸腾，然后高压灭菌，121℃20min，得到生长培养基，冷却后按10mL分装，-20℃冻存，用于菌种的制备；