[发明专利]鸭MHCI类分子单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了鸭MHCI类分子单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明将MHC I类分子uaa基因α2和α3保守区域片段进行原核表达，将所表达的蛋白产物纯化后作为免疫原采用细胞融合技术制备融合细胞，通过IFA筛选共获得5株IFA阳性杂交瘤细胞；利用DuLMSC细胞表面表达MHC I类分子的性质，采用流式细胞术比较各单抗的亲和力，结果发现G1株检测到的阳性DuLMSC细胞数最高，因此将G1株所分泌的单抗作为鸭MHC I类分子的单克隆抗体。通过各种常规的免疫学方法，本发明所提供的MHCI类分子单克隆抗体能够应用于检测鸭细胞表面的MHC I类分子或MHC I类分子表达量的变化。

技术领域

本发明涉及单克隆抗体，尤其涉及鸭MHCI类分子单克隆抗体及其制备方法和应用，属于鸭MHCI类分子单克隆抗体的制备及应用领域。

背景技术

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是一组紧密连锁、高度多态的染色体基因群，编码一组重要的与免疫相关的细胞膜糖蛋白，广泛存在于有颌脊椎动物中，与人类或动物的抗病性和免疫应答水平密切相关。MHC主要负责与免疫有关的细胞间的相互识别和抗原呈递。当一个抗原被抗原呈递细胞捕获之后，它将被分解成若干个多肽片段。主要组织相容性抗原与特定的抗原多肽片段相结合，所形成的复合体转移到细胞表面，并被淋巴细胞识别，从而诱导免疫应答。

MHC I类分子是由跨膜糖蛋白重链和保守的免疫球蛋白样β2m微球蛋白以非共价键结合形成的异二聚体。鸭MHCI类分子的重链编码基因有5个，按基因组上的顺序依次命名为UAA、UBA、UCA、UDA和UEA，5个拷贝基因的序列长度基本一致，核苷酸序列同源性介于86.8％～90.4％。已知UAA优势转录表达，其余四个低度表达或不表达。

一个单拷贝MHC I重链基因组的序列全长2551bp，由8个外显子和7个内含子组成，外显子1～5分别编码信号肽、α1、α2、α3和跨膜区，外显子6～8共同编码CY区域。编码区序列全长1065bp，编码356个氨基酸(aa)残基，由α1(88个aa)、α2(92个aa)、免疫球蛋白样α3(91个aa)、肽结合区、跨膜区(34个aa)以及胞浆区(28个aa)组成。在α2和α3区域分别存在4个半胱氨酸(101，173，210，268位)，可形成两个链内二硫键。β2m以非共价键与α3区域结合，α3氨基酸序列保守。α1和α2区域形成一个“开放的口袋”，通过2个α螺旋和1个β折叠形成1个结合槽，槽内的氨基酸序列具有高度多态性,能结合种类繁多的内源性抗原肽。

MHCI类分子具有重要的免疫学功能，分布于所有有核细胞的表面，结合内源性抗原肽，递呈到细胞表面，供CD8+T细胞识别，从而激活细胞毒性T淋巴细胞，杀死转化细胞或病毒感染细胞；人和小鼠的MHC I类分子还是自然杀伤(Natural killer,NK)细胞的受体，能激活NK细胞的活性，是主要引起组织免疫排斥的抗原成分。

MHCI类分子能够反映单细胞的免疫水平。能够高亲和力结合MHCI类分子的单抗是必须使用的试剂材料。至今没有鸭MHCI类分子单抗的研究报道和商品化产品的原因有多种，主要包括家鸭受人工驯化时间短、家养鸭遗传背景繁杂、绝大多数在自然环境下生长，携带病原情况复杂有关。