[发明专利]一种快速检测ALK基因重排探针、FISH试剂盒及方法在审

申请号：	201910868304.2	申请日：	2019-09-16
公开（公告）号：	CN110541032A	公开（公告）日：	2019-12-06
发明（设计）人：	周勇;唐银	申请（专利权）人：	重庆威斯腾生物医药科技有限责任公司
主分类号：	C12Q1/6886	分类号：	C12Q1/6886;C12Q1/6841;C12N15/11
代理公司：	暂无信息	代理人：	暂无信息
地址：	400039 重庆市九龙坡区二***	国省代码：	重庆;50
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摘要：
搜索关键词：	基因重排快速检测靶向位点试剂盒探针蛋白红色荧光染料技术利用快速杂交细胞形态基因假阳性介导检测灵活
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【权利要求书】：

1.一种快速检测ALK基因重排探针，包括dcas9蛋白和sgRNA，所述dcas9蛋白由绿色或者红色荧光染料标记，所述sgRNA分为第一组sgRNA和第二组sgRNA，所述第一组sgRNA包括22条sgRNA，所述第一组sgRNA在ALK基因上的靶向位点序列如序列表SEQ ID NO.1 -SEQ IDNO.22 所示，所述第二组sgRNA包括22条sgRNA，所述第二组sgRNA在ALK基因上的靶向位点序列如序列表SEQ ID NO.23 -SEQ ID NO.44 所示。

2.如权利要求1所述的探针，其特征在于，所述第一组sgRNA针对ALK基因10号断裂点上游设计，所述第二组sgRNA针对ALK基因20号断裂点下游设计。

3.如权利要求2所述的探针，其特征在于，所述绿色荧光染料为HaloTag ® AlexaFluor ® 488，所述红色荧光染料为Janelia Fluor ®646。

4.如权利要求3所述的探针，其特征在于，所述绿色荧光染料标记的dcas9蛋白与所述第一组sgRNA结合后组成第一组探针；所述红色荧光染料标记的dcas9蛋白与所述第二组sgRNA结合后组成第二组探针；其中dcas9蛋白与sgRNA组装的摩尔比例为1:1-1:4。

5.一种快速检测ALK基因重排FISH试剂盒，其特征在于，包括权利要求4所述的第一组探针和第二组探针。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：Bloking/ReactingBuffer、复染液和对照dcas9蛋白。

7.一种快速检测ALK基因重排方法，其特征在于，利用权利要求6所述的快速检测ALK基因重排FISH试剂盒进行检测，包括以下步骤：

（1）洗涤：PBST摇晃洗涤样品5min；

（2）Bloking/Reacting Buffer 37℃孵育样品15min；

（3）将探针加入样品中，37℃孵育15min，其中对照组仅加入dcas9蛋白，sgRNA用Bloking/Reacting Buffer代替；

（4）PBST洗涤样品，3次，每次5min；

（5）DAPI复染样品，室温，5min，洗涤，封片；

（6）在荧光显微镜下观察采集图像。