[发明专利]维生素D3对绵羊免疫力及抗氧化性能的影响实验方法

权利要求书

1.维生素D3对绵羊免疫力及抗氧化性能的影响实验方法，包括以下步骤：步骤一，试验动物选择与分组；步骤二，试验日粮与饲养管理；步骤三，生长性能测定；步骤四，血常规的测定；步骤五，抗氧化性能测定；步骤六，数据统计与分析；其特征在于：

其中在上述步骤一中，试验动物选择与分组包括以下步骤：

1)选取25只2月龄的公绵羊，体重在20-25kg之间，随机分为5组，每组5个重复，每个重复1只绵羊；

2)预饲期10d，试验期70d，所有分组均饲喂基础日粮和微贮豆秸，对照组维生素D3的添加量为0IU/kg，试验组维生素D3的添加量分别为300IU/kg、600IU/kg、900IU/kg和1200IU/kg；

其中在上述步骤二中，试验日粮与饲养管理包括以下步骤：

1)将豆秸揉搓成1-3cm的长度，将微生物菌剂、红糖和水混匀，然后均匀的撒在秸秆上，密封时用打包机器压紧密封打包，发酵一个月后即可开启使用微生物发酵豆秸；

2)每只绵羊的日进食量根据绵羊的日增重随时进行调整，精粗比为1∶2(以干物质为基础)，试验期饲喂2次，以先粗后精顺序饲喂，自由饮水；

其中在上述步骤三中，在正试期始末，分别对试验羊进行称重，记录每天的采食情况，计算平均日采食量及平均日增重；

其中在上述步骤四中，在试验期的最后一天，用EDTA采血管对所有公羊进行空腹颈静脉采血，采血量为每只3mL；

其中在上述步骤五中，抗氧化性能测定包括以下步骤：

1)血液采集及处理：在试验期的最后一天，用普通采血管对所有的公羊进行空腹颈静脉采血，采血量为每只5mL，静置，析出血清，离心10min，吸取血清，分装于5mL的离心管中，置于-20℃冰箱冷冻备用；

2)组织样品采集及处理：在试验期的最后一天，每组随机挑选4只绵羊进行屠宰取样，分别采集肝脏、肾脏、脾脏、胸腺、肠系膜淋巴、睾丸、附睾置于冻存管中，放入液氮备用；对样品进行称重并研磨成粉末，按组织与生理盐水1∶9的比例制备成10％匀浆，离心后吸取上清备用；

3)测定各组织中的CAT、T-SOD和GSH-PX活性和MDA含量及蛋白浓度含量；

其中在上述步骤六中，采用SPSS 21.0软件中的独立样本t检验对试验数据进行显著性比较，结果以“平均值±标准误差”表示。

2.根据权利要求1所述的维生素D3对绵羊免疫力及抗氧化性能的影响实验方法，其特征在于：所述步骤二1)中，微生物菌剂、红糖和水的比例为1∶20∶80，微贮菌剂的益生菌总数≥5×10⁷个/g。

3.根据权利要求1所述的维生素D3对绵羊免疫力及抗氧化性能的影响实验方法，其特征在于：所述步骤二2)中，所有试验绵羊的饲养管理均符合动物伦理福利保护规定。

4.根据权利要求1所述的维生素D3对绵羊免疫力及抗氧化性能的影响实验方法，其特征在于：所述步骤二2)中，基础日粮由42％的玉米、30％的麦麸、24％的豆粕和4％的预混料组成。

5.根据权利要求1所述的维生素D3对绵羊免疫力及抗氧化性能的影响实验方法，其特征在于：所述步骤二2)中，饲喂时间为每天8：00和18：00。

6.根据权利要求1所述的维生素D3对绵羊免疫力及抗氧化性能的影响实验方法，其特征在于：所述步骤五1)中，离心速度为2500r/min。

7.根据权利要求1所述的维生素D3对绵羊免疫力及抗氧化性能的影响实验方法，其特征在于：所述步骤六中，以P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著。