[发明专利]维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法

说明书

本发明公开了维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法，包括以下步骤：步骤一，试验动物分组与饲养；步骤二，绵羊组织取样；步骤三，绵羊组织总RNA提取；步骤四，cDNA合成；步骤五，细胞凋亡相关基因及VDR的引物设计；步骤六，荧光定量PCR；步骤七，数据统计与分析；对照组维生素D3的添加量为0IU/kg，试验组维生素D3的添加量分别为300IU/kg、600IU/kg、900IU/kg和1200IU/kg；该维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法，通过微贮豆秸中添加不同浓度维生素D3饲喂绵羊探索研究维生素D3对绵羊细胞凋亡的作用机制，最后得出维生素D3添加水平在300IU/kg时有利于提高绵羊免疫力及降低组织细胞凋亡，实验过程严谨，结果可靠。

技术领域

本发明涉及维生素D3受体技术领域，具体为维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法。

背景技术

我国作为农业大国，有十分丰富的农作物秸秆，对于秸秆的再利用一直是社会关注的问题。秸秆焚烧是最经济、最快捷、最有效的秸秆处理方法。然而，焚烧秸秆会导致燃烧不完全，释放出大量的有毒空气污染物，如挥发性有机化合物、一氧化碳、细颗粒物/可吸入颗粒物、致癌的多环芳香烃等，在日本，研究发现秸秆焚烧与儿童哮喘病有关。秸秆焚烧还会引起诸多环境问题和秸秆营养成分的流失。因此，秸秆资源的再利用问题已经迫在眉睫。近年来，人们对于维生素D3受体(VDR)的关注越来越多，其生理功能也依次被发现。VDR最早的报道是其在维持骨骼健康和钙稳态方面发挥着重要作用。此外，VDR在炎症、糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、细胞增殖和分化、肿瘤组织等方面发挥着重要的作用。维生素D3可以提高VDR的表达能力，VDR水平通过转录和翻译后也可调节维生素D3。由此可见，通过研究组织中的VDR的作用可探索维生素D3的生理病理学作用。因此设计维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法是十分有必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：维生素D3对绵羊的免疫力和生殖功能的影响实验方法，包括以下步骤：步骤一，试验动物分组与饲养；步骤二，绵羊组织取样；步骤三，绵羊组织总RNA提取；步骤四，cDNA合成；步骤五，细胞凋亡相关基因及VDR的引物设计；步骤六，荧光定量PCR；步骤七，数据统计与分析；

其中在上述步骤一中，试验动物分组与饲养包括以下步骤：

1)选取25只2月龄的公绵羊，体重在20-25kg之间，随机分为5组，每组5个重复，每个重复1只绵羊；

2)预饲期10d，试验期70d，所有分组均饲喂基础日粮和微贮豆秸，对照组维生素D3的添加量为OIU/kg，试验组维生素D3的添加量分别为300IU/kg、600IU/kg、900IU/kg和1200IU/kg；

3)将豆秸揉搓成1-3cm的长度，将微生物菌剂、红糖和水混匀，然后均匀的撒在秸秆上，密封时用打包机器压紧密封打包，发酵一个月后即可开启使用微生物发酵豆秸；

4)每只绵羊的日进食量根据绵羊的日增重随时进行调整，精粗比为1∶2(以干物质为基础)，试验期饲喂2次，以先粗后精顺序饲喂，自由饮水；

其中在上述步骤二中，在试验期的最后一天，每组随机挑选4只绵羊进行屠宰取样，分别采集肝脏、肾脏、脾脏、胸腺和肠系膜淋巴置于冻存管中，放入液氮备用；

其中在上述步骤三中，绵羊组织总RNA提取包括以下步骤：

1)先将研钵进行高压灭菌，然后用液氮对其进行遇冷处理，随后迅速将绵羊组织从液氮中取出，置于研钵中研磨，将研碎的组织置于EP管中，加入适量Trizol，做好标记，用力震荡混匀，即可静置于冰上；