[发明专利]一种血液病原体灭活效果质量控制方法在审
| 申请号： | 201910871069.4 | 申请日： | 2019-09-16 |
| 公开（公告）号： | CN110551852A | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 杨春晖;曾沛斌;徐敏;李世林;李玉佳;段晓琼;叶海艳;陈利民 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院输血研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 51241 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 胡文莉 |
| 地址： | 610052 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 灭活 血浆样品 血液病原体 病毒灭活 质量控制 扩增 人线粒体DNA 核酸序列 两对引物 引物设计 血浆DNA 常规的 长片段 亚甲蓝 减去 短片 血浆 血站 引物 | ||
【权利要求书】：
1.一种血液病原体灭活效果质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)引物设计：根据人线粒体DNA的核酸序列设计了两对引物，分别可扩增163bp长的mtDNA短片段和1856bp的长片段；
(2)分别在亚甲蓝病毒灭活前后提取血浆样品中的DNA；
(3)以提取的血浆DNA为模板，用步骤(1)中的引物分别对灭活前后血浆样品中的mtDNA进行PCR扩增；
(4)使用扩增后1856bp片段的ct值减去163bp片段的ct值，得到两种片段的差值即dCP值，通过dCP值的大小初步判断血浆样品是否经过灭活。
2.根据权利要求1所述的一种血液病原体灭活效果质量控制方法，其特征在于，步骤(3)PCR扩增使用体系为分别加入PCR MIX buffer35uL、100mM的dNTP1uL、设计好的100mM上下游引物各0.25uL、40X的SyBR Green0.5uL、5U/uL的FastStart Taq 0.5uL及提取好的DNA模板15uL，混匀后形成57.5uL的PCR反应体系；将混匀后的反应体系置于荧光定量PCR仪中进行扩增；扩增条件为95℃孵育1min，然后进行45个循环的95℃孵育30sec、60℃孵育30sec和72℃孵育45sec。
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