[发明专利]一种基于HPLC/UPLC-QTOF-MS检测骨碎补中多成分的方法

说明书

本发明提供了一种基于HPLC/UPLC‑QTOF‑MS检测骨碎补中多成分的方法，包括如下步骤：(1)取骨碎补样品制成骨碎补粉末，精密称定，然后与溶剂混合，称定重量，超声处理，摇匀，过滤，取续滤液，得到待测样品；(2)用HPLC/UPLC分离步骤(1)中的待测样品，然后用质谱检测，得成分物质峰，用分析软件对所述成分物质峰进行定性分析。本发明采用HPLC/UPLC‑QTOF‑MS技术对骨碎补中多成分进行检测，该方法操作简便、快速、准确、高效，实现了骨碎补中多成分的快速定性分析，对于提高骨碎补药材的质量标准有重要意义。

技术领域

本发明涉及医药成分分析领域，具体涉及一种基于HPLC/UPLC-QTOF-MS检测骨碎补中多成分的方法。

背景技术

骨碎补为水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根茎，性温、味苦，归肝、肾经，具有强骨补肾、止痛续伤之功效。临床主要用于筋骨折伤、肾虚腰痛、筋骨痿软、耳鸣耳聋、牙齿松动等；外治斑秃、白癜风和外用消风祛斑等病症。研究报道，其主要含有黄酮类、苯丙素类、酚酸类、三萜类、挥发油等多种活性成分，其中以柚皮苷代表的二氢黄酮类为骨碎补中主要成分(王凤娇,王婷婷,徐铭胡等.骨碎补化学成分及其对PC12细胞的保护作用研究[J].中国药学杂志,2018,53(16):1359-1365)。现代药理学研究骨碎补具有促增殖分化作用、抗骨质疏松作用、抗炎作用、促进骨折愈合、牙骨细胞保护作用、肾保护作用、防治药物中毒性耳聋、降血脂等作用(李晋玉,赵学千,孙旗,等.骨碎补总黄酮的实验及临床研究概况[J].中国骨质疏松杂志,2018,24(10):1357-1364)。

由于骨碎补药效物质基础尚不明确，药材的质量控制手段主要有传统的生药学研究(张炎兵,田军明.骨碎补的生药研究[J].中医药导报,2013,19(12):104,107)、以柚皮苷为对照的TLC法(韦国麟.刘华珍,蔡杰,等.藿草壮骨合剂中淫羊藿、骨碎补等薄层色谱鉴别方法的研究[J].按摩与康复医学,2015,6(16):75-77)、HPLC指纹图谱(刘珂弟,乔雪,梁永红,等.骨碎补的HPLC指纹图谱研究[J].中草药,2011,42(3):510-514)、GC指纹图谱(李晓红,姜明燕,熊志立.骨碎补药材脂溶性成分的气相色谱指纹图谱[J].山西医药杂志,2013,42(11):1211-1212)，含量测定方面多集中在几种黄酮类的测定(王清华.HPLC-UV法测定烫骨碎补中柚皮苷的含量[J].宜春学院学报,2017,39(9):20-22；杨海玲,吴丽丹,谢鹏,等.HPLC法比较骨碎补不同炮制品中柚皮苷、5-羟甲基糠醛含量[J].中药材,2016,39(11):2509-2512)，在《中国药典》2015年版一部中，骨碎补项下采用柚皮苷进行TLC鉴别，以HPLC法测定柚皮苷的含量作为质控手段。这些技术手段和方法难以全面系统的表征化学成分轮廓特征和控制药材的内在质量。传统生药学研究，有时候带有一定的主观性，在复杂的中药材质量控制中有一定的局限性；而经典的TLC法中存在大量的假阳性和假阴性问题，易导致实验结论的偏差；以HPLC为主的中药指纹图谱技术基于从整体面貌上辨认样品的真实性，在中药质量控制中发挥重要角色，但中药材基原广泛、中药材受品种、产地、种植、采收、炮制等多种因素影响，难以控制，不同药材其指纹图谱有一定的差异，实验室条件、仪器设备的不同也会影响指纹图谱的重现性；GC-MS法更多的适用于含挥发性成分为主的中药材质量控制的应用。

高效或超高效液相色谱法(HPLC或UPLC)分离效果好，分析速度快，非常适合多组分快速检测，而四级杆串联飞行时间质谱(Q-TOF)分辨率高、灵敏度高，结合同位素分析和高分辨的分子量，能够实现分子量的精确测定，适合复杂基质中组分的检测定性，因此HPLC/UPLC-QTOF-MS已成为复杂基质中多成分的有效快速准确的检测手段，一种简便、快速、准确、高效的对骨碎补进行全成分分析的方法亟待开发出来。

发明内容

发明要解决的问题