[发明专利]一种用于小分子量蛋白质分离的聚丙烯酰胺凝胶及其制备方法有效
申请号: | 201910871754.7 | 申请日: | 2019-09-16 |
公开(公告)号: | CN110527017B | 公开(公告)日: | 2022-08-30 |
发明(设计)人: | 杨颂;王绪德;张高英 | 申请(专利权)人: | 武汉赛维尔生物科技有限公司 |
主分类号: | C08F220/56 | 分类号: | C08F220/56;C08F222/38;C08J3/075;C08K5/17;C08K5/053;C08K3/38;C07K1/26 |
代理公司: | 武汉天领众智专利代理事务所(普通合伙) 42300 | 代理人: | 林琳 |
地址: | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 分子量 蛋白质 分离 聚丙烯酰胺 凝胶 及其 制备 方法 | ||
1.一种用于小分子量蛋白质分离的聚丙烯酰胺凝胶的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤1:配制30%丙烯酰胺储备液,其中丙烯酰胺和N,N-甲叉双丙烯酰胺的质量比为29:1,具体的实施步骤如下:
A、首先,称取29g的丙烯酰胺以及1g的N,N-甲叉双丙烯酰胺加入混合容器中;
B、然后,向容器中加入超纯水,使得丙烯酰胺和N,N-甲叉双丙烯酰胺溶于超纯水中;
C、最后,将混合溶液定容至100ml;
步骤2:配制10%过硫酸铵储备液,称取100mg过硫酸铵溶于1ml超纯水中得到混合溶液;
步骤3:配制2.5×凝胶缓冲液,具体的实施步骤如下:
a、称取3.7856g Tris base和2.3175g硼酸混合加入容器中,并加入80ml超纯水;
b、向混合溶液中继续加入HCl滴定到PH为7.0;
c、最后将混合溶液定容至100ml;
步骤4:配制50%甘油,称取50g甘油,加入50ml超纯水得到混合溶液;
步骤5:配制5%浓缩胶,具体的实施步骤如下:
(1)、首先,取1ml步骤1中的30%丙烯酰胺储备液,然后2.4ml步骤3中的凝胶缓冲液;
(2)、然后,加入30ul步骤2中的10%过硫酸铵储备液,并加入超纯水定容至6ml;
(3)、最后,在临灌胶前加入6ul的四甲基乙二胺;
步骤6:配制10%分离胶,具体的实施步骤如下:
S1、取4ml步骤1中的30%丙烯酰胺储备液,再加入4.8ml步骤3中的2.5×凝胶缓冲液,继续加入1.2ml步骤4中的50%甘油;
S2、加入60ul步骤2中的10%过硫酸铵储备液,再加超纯水定容至12ml;
S3、临灌胶前加入6ul的四甲基乙二胺。
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