[发明专利]一种利用水稻种子快速检测分子特征和品种纯度的方法

说明书

本发明公开了一种利用水稻种子快速检测分子特征和品种纯度的方法，步骤：(1)水稻种子PCR模板的制备：将水稻种子放于水中浸泡，取1粒加NaOH溶液，NaOH溶液的溶剂为含有EDTA的水，研碎，加热，冷却至室温，加入Tris‑HCl，涡旋混匀，室温下离心，取上清加入(NH₄)₂SO₄水溶液，即为水稻种子PCR模板；(2)PCR扩增，得到扩增产物；(3)产物检测：将扩增产物电泳分析，得到检测结果。本发明的方法利于储存，稳定性高。本发明的方法所需材料较少、成本较低、操作较简便快捷，能够在短时间内处理大量的样本，因此能够对大量的水稻样品进行分子特征和品种的种子纯度检测。

技术领域

本发明涉及一种利用水稻种子快速检测分子特征和品种纯度的方法，属于分子生物技术领域。

背景技术

水稻是我国重要的粮食作物，由于我国人口的不断增加、可用耕地面积不断减少和自然灾害的频发等各方面的压力，培育高产优质多抗的水稻品种仍是提高我国粮食安全的重要环节。近年来，随着分子生物学的飞速发展，分子生物学技术已经深入到农业育种各个领域，如分子育种可以解决水稻种质资源狭窄的问题。

而基因文库构建、分子标记辅助育种、转基因检测等都以提取DNA为前提。现有技术，DNA的提取与纯化耗时长，在很大程度上影响着整个检测程序的效率与重复率。目前，在植物中已有大量的关于基因组DNA提取方法的报道，可以从植物叶片、果实、幼苗等中提取DNA，常用的DNA提取方法为CTAB法。这些方法存在较多的局限性，例如取样量较大、耗时长、步骤多、高毒物质较多、价格昂贵，同时处理大批样品时工作量较大，不适合应用于快速检测。

在基于PCR技术的品种分子特性检测和品种纯度等方面的研究，基因组DNA模板的质量要求较低，在检测量较大时耗时太大，而且其中大多数样品只会进行一次PCR反应，因此建立一种快速简单的直接PCR扩增方法十分有必要。

碱性裂解法是一种可有效提取植物DNA的方法，其工作原理是利用碱液使细胞膜蛋白变性，DNA被释放出来，从而分离DNA。现有的碱性裂解法方法多以叶片或幼苗为材料。通过水稻种子发芽获得叶片所需的时间较长，且水稻种子更加稳定，更易于储存。不同的植物组织应选择适宜的处理方法，现有的碱性裂解法只适用于植物幼苗和叶片，因此，亟需一种操作简单，快速的水稻种子PCR模板的制备方法，节省水稻萌发产生幼苗的时间，并能够快速检测水稻分子特征和品种的种子纯度。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种利用水稻种子快速检测分子特征和品种纯度的方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种利用水稻种子快速检测分子特征和品种纯度的方法，包括如下步骤：

(1)水稻种子PCR模板的制备：将水稻种子放于水中，浸泡2-48h，取1粒浸泡后的水稻种子，放入Eppendorf管中，加入100-400μL0.1-0.4mol/LNaOH溶液，所述NaOH溶液的溶剂为含有终浓度0.5-1.5mmol/L EDTA的水，研碎水稻种子，在65-100℃水中间接加热1-30min，冷却至室温，加入50-150μL 1mol/L，pH＝8.0的Tris-HCl，涡旋混匀，室温下离心，取上清加入100μL，10-30mmol/L(NH₄)₂SO₄水溶液，涡旋混匀，即为水稻种子PCR模板；

(2)PCR扩增：将步骤(1)得到的水稻种子PCR模板进行PCR扩增，得到扩增产物；

(3)产物检测：将步骤(2)所得的产物进行电泳分析，得到检测结果。