[发明专利]自噬基因MAP1LC3在家兔激素性股骨头缺血坏死中的表达方法

说明书

一种自噬基因MAP1LC3在家兔激素性股骨头缺血坏死中的表达方法，使用激素诱导出激素性股骨头缺血坏死动物模型，检测激素对骨细胞、成骨细胞MAP1LC3的mRNA与蛋白高表达影响；探讨3‑甲基腺嘌呤，调控骨细胞、成骨细胞自噬型死亡以及骨细胞、成骨细胞MAP1LC3的mRNA与蛋白高表达，显示第一、二、三、四周时：B组的MAP1LC3 mRNA呈高表达,C组中骨细胞的MAP1LC3 mRNA表达量较B组均降低。第一、二周B组中MAP1LC3蛋白高表达,C组中MAP1LC3蛋白表达明显下降。免疫荧光染色:B组中骨细胞、成骨细胞的GFP‑LC3融合蛋白表达均较对照组升高，C组GFP‑LC3融合蛋白表达明显下降。激素导致SANFH模型中骨细胞、成骨细胞的自噬型细胞死亡；导致骨细胞、成骨细胞的MAP1LC3的mRNA与蛋白高表达。3‑MA抑制骨细胞、成骨细胞自噬型细胞死亡。

技术领域

本发明涉及激素性股骨头缺血坏死研究领域，特别涉及一种自噬基因MAP1LC3在家兔激素性股骨头缺血坏死中的表达方法。

背景技术

股骨头缺血坏死(Steroid-induced Avascular Necrosis of Femoral Head,简称SANFH)是令整个中国乃至世界医疗界都很棘手的难题，导致股骨头缺血坏死的原因多种多样，而在治疗期间长久的使用或短期内使用大剂量肾上腺皮质激素(下文简称激素)所导致的股骨头缺血坏死更是令整个医疗界困惑。激素导致的股骨头缺血坏死发生的生物学过程相当复杂，她的发病机制直至今日都没有明确的定义，临床上对于它的理想治疗更是束手无策。从1957年开始，股骨头缺血坏死的发病机理开始被许多学者研究，并逐渐提出了像脂肪代谢紊乱、骨内压升高、骨质疏松、激素的细胞毒作用、血管内凝血、潜在血管炎及血管损伤、前凝血状态等诸多比较分散的学说。虽然他们都从多种不同方面阐述了股骨头缺血坏死的发病机理，也为后来学者能够深入研究股骨头缺血坏死的病因学机制打下基础，但就SANFH早期骨细胞、成骨细胞的病理改变及其潜在原因，特别是细胞的死亡方式及其可逆转因素一直未能明确，至今仍有许多质疑。近年，随着分子生物学的发展，研究者更多倾向于关注基因表达与调控在疾病中的作用，而程序性细胞死亡(凋亡型与自噬型)理论亦逐渐受到重视，也已成为研究组织器官衰老、损伤等发病机制的重要研究方向。程序性细胞死亡是由基因调控的多细胞有机体为满足机体发育、使自体内环境保持相对稳定的主动死亡过程，是细胞自然死亡的一种，是正常的生理过程。然而，当程序性细胞死亡调控发生改变时便可引起疾病的发生。已有学者开始对骨细胞、成骨细胞凋亡型程序性细胞死亡在SANFH中的作用进行了初步探讨，对其发病机制有了新的认识。但对于自噬型程序性细胞死亡在SANFH中的作用至今未见公开研究报道。因此，探明SANFH的病因学机制，仍然是该领域研究的重要内容。近年，我们的相关工作更多的集中于促血管生长因子及其差异表达基因的研究。我们的前期研究结果表明，激素对股骨头节段血管中PDGF与VEGF的超强抑制而引起的血供中断与SANFH存在关联性，诸多促血管生长因子及差异表达基因的调控在SANFH中发挥着重要作用。