[发明专利]一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法

说明书

本发明提供了一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法，通过利用硅胶柱色谱及半制备高效液相从藤茶组织中分离、纯化二氢杨梅素，利用LC‑HR‑ESI MS、1D和2D NMR波谱数据分析，鉴定其结构分别为(+)Dihydromyricetin(60.5mg)，通过HPLC检测分析化合物的纯度≥98％。本发明解决高效、经济地从藤茶老叶、残次叶中分离、纯化和鉴定(+)Dihydromyricetin(1)活性单体化合物的方法，充分利用藤茶老叶、残次叶，避免藤茶资源浪费，创造巨大经济效益，有利于促进藤茶产业发展。

技术领域

本发明属于藤茶资源研究开发利用技术领域，涉及一种利用高效液相色谱(HPLC)和液态核磁共振波谱(Liquid NMR)仪从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素单体化合物的方法，本发明具体涉及一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法。

背景技术

藤茶，俗称莓茶(武陵特产)、藤婆茶，系葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄种。在鄂、湘、川、黔、闽均有分布，主要分布在中国武陵山区的砂石坡地。藤茶是被《本草纲目》遗漏的珍品，富含人体必须的17种氨基酸、14种微量元素及多糖等，是已经发现的自然硒和黄酮成份含量最高的野生植物，是宝贵的药食两用纯天然植物。

本发明具体涉及藤茶是葡萄科(Vitaceae)、蛇葡萄属(Ampelopsis Michx) 植物Ampelopsis grossedentata的干燥叶和茎加工成，是广泛分布于中国的山区的药食两用的饮品。在藤茶中分离和鉴定出一些列含量丰富、具有重要生理功能的黄酮类如二氢杨梅素、杨梅素和花旗松素等活性成分。本发明人研究发现藤茶幼嫩茎尖(利川产地)中二氢杨梅素的含量为186.31±10.43mg/g，二氢杨梅素的积累在藤茶幼嫩茎尖组织中高达18％。研究表明二氢杨梅素具有抗氧化，抗神经炎症，神经保护，抗老年痴呆症，抗菌，抗癌等多种生理活性。但是不同产区的藤茶幼嫩茎尖组织采收后，老叶、残次叶的黄酮类活性成分未得到充分利用，造成了藤茶资源的浪费。

发明内容

本发明的目的在于高效、经济地从藤茶老叶、残次叶中分离分离纯化和鉴定二氢杨梅素(+)Dihydromyricetin单体化合物的方法，充分利用藤茶老叶、残次叶，避免资源浪费，从而创造经济效益。

本发明一种从藤茶组织中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于步骤如下：

a.收集藤茶老叶、残次叶，乙醇超声粗提取总黄酮类化合物；

b.按步骤a取得粗黄酮浸膏利用正相硅胶柱色谱分离，得到含有目标活性成分的组分；

c.将含有目标活性成分的组分用半制备高效液相分离纯化得到活性化合物的单体；

d.依据利用LC-HR-ESI MS、1D和2D NMR波谱数据解析目标化合物的单体结构。

本发明一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定二氢杨梅素的方法，其特征在于步骤b将总黄酮提取浸膏与100-200目正相硅胶等量混合拌样，5倍质量300-400 目正相硅胶装柱，编号A柱，用溶剂石油醚、乙酸乙酯、甲醇洗脱，洗脱程序按照：A-1,A-2至A-7，其中A柱洗脱程序为：洗脱体积：为5倍柱体积，A-1洗脱组分100％石油醚；A-2洗脱组分80％石油醚，20％乙酸乙酯；A-3洗脱组分50％石油醚，50％乙酸乙酯；A-4洗脱组分20％石油醚，80％乙酸乙酯；A-5洗脱组分 100％乙酸乙酯；A-6洗脱组分80％乙酸乙酯，20％甲醇；A-7洗脱组分50％乙酸乙酯，50％甲醇。