[发明专利]一种从藤茶组织中分离纯化和鉴定花旗松素的方法

权利要求书

1.一种从藤茶组织中分离纯化花旗松素的方法，其特征在于步骤如下：

a.收集藤茶老叶、残次叶，乙醇超声粗提取总黄酮类化合物；

b.按步骤a取得粗黄酮浸膏利用正相硅胶柱色谱分离，得到含有目标活性成分的组分；

c.将含有目标活性成分的组分用半制备高效液相分离纯化得到活性化合物的单体；

d.依据利用LC-HR-ESIMS、1D和2D NMR波谱数据解析目标化合物的单体结构。

2.按照权利要求1所述的一种从藤茶组织中分离纯化花旗松素的方法，其特征在于步骤b将总黄酮提取浸膏与100-200目正相硅胶等量混合拌样，5倍质量300-400目正相硅胶装柱，编号A柱，用溶剂石油醚、乙酸乙酯、甲醇洗脱，洗脱程序按照：A-1,A-2至A-7，其中A柱洗脱程序为：洗脱体积：为5倍柱体积，A-1洗脱组分80％石油醚，20％乙酸乙酯；A-2洗脱组分60％石油醚，40％乙酸乙酯；A-3洗脱组分40％石油醚，60％乙酸乙酯；A-4洗脱组分20％石油醚，80％乙酸乙酯；A-5洗脱组分100％乙酸乙酯；A-6洗脱组分80％乙酸乙酯，20％甲醇；A-7洗脱组分50％乙酸乙酯，50％甲醇；

将所述含有目标活性化合物的组分A-6与100-200目正相硅胶等量混合拌样，5倍质量300-400目正相硅胶装柱，编号B柱，用溶剂氯仿、甲醇洗脱，洗脱程序按照：B-1,B-2至B-7，其中B柱洗脱程序为：洗脱体积：为5倍柱体积，B-1洗脱组分100％氯仿；B-2洗脱组分98％氯仿，2％甲醇；B-3洗脱组分96％氯仿，4％甲醇；B-4洗脱组分94％氯仿，6％甲醇；B-5洗脱组分92％氯仿，8％甲醇；B-6洗脱组分85％氯仿，15％甲醇；B-7洗脱组分80％氯仿，20％甲醇；

将含有目标活性化合物的组分B-3、B-4与300-400目反相硅胶等量混合拌样，10倍质量300-400目反相硅胶装柱，编号C柱，用溶剂丙酮、水洗脱，洗脱程序按照：C-1,C-2至C-8，其中C柱洗脱程序为：洗脱体积：为5倍柱体积，C-1洗脱组分5％丙酮，95％水；C-2洗脱组分15％丙酮，85％水；C-3洗脱组分20％丙酮，80％水；C-4洗脱组分25％丙酮，75％水；C-5洗脱组分30％丙酮，70％水；C-6洗脱组分35％丙酮，65％水；C-7洗脱组分40％丙酮，60％水；C-8洗脱组分45％丙酮，55％水。

3.按照权利要求1所述的一种从藤茶组织中分离纯化花旗松素的方法，其特征在于步骤C将所述将含有目标活性化合物的组分C-6,用乙腈和水梯度洗脱，用岛津高效液相C18反相柱分离纯化：A相：85％H₂O、15％乙腈、0.1％乙酸，B相：15％H₂O、85％乙腈、0.1％乙酸，流速为2.5ml/min，洗脱程序按：Time：0.01min，A相85％，B相15％；Time：23min，A相50％，B相50％；Time：28min，A相0％，B相100％；Time：27min，A相0％，B相100％；Time：27.1min，A相80％，B相20％；Time：30min，stop；检测波长290nm，28％B相等度洗脱，得到化合物花旗松素：Rt＝17.5min。

4.一种花旗松素的鉴定方法，其特征在于花旗松素活性化合物结构的MS、¹H NMR谱、¹³CNMR谱、DEPT135 NMR谱鉴定：化合物花旗松素的[M+H]⁺305.1，鉴定为花旗松素单体化合物。