[发明专利]一种试剂盒、肿瘤细胞检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种试剂盒、肿瘤细胞检测方法及其应用，涉及肿瘤细胞检测技术领域。本发明的试剂盒，由于A液中的环三磷腈掺杂石墨烯量子点具有非常稳定的肿瘤细胞荧光标记功能，能够识别ROS水平较高的肿瘤细胞，在基于细胞内ROS水平评估的肿瘤细胞检测中，具有高度敏感性、高度特异性和可重复性的优点。本发明的肿瘤细胞检测方法，可快速转染患者全血血液样本中的肿瘤细胞，使其发射黄色荧光，易于被分光光度计捕捉到荧光信号，从而实现检测。该方法与传统方法相比，具有反应灵敏、操作简便、成本低廉、靶向性高、识别率高等优势，可作为实现临床肿瘤患者血液肿瘤细胞检测的有效方法。

技术领域

本发明涉及肿瘤细胞检测技术领域，尤其涉及一种试剂盒、肿瘤细胞检测方法及其应用。

背景技术

恶性肿瘤是目前影响人类健康的头号元凶。尽管肿瘤诊断与治疗的手段在不断发展，但是由于肿瘤的异质性、隐匿性等原因，现有的肿瘤诊疗手段仍难以有效地克服肿瘤的复发、转移。恶性肿瘤的临床表现因其所在的器官、部位以及发展程度的不同而不同，但恶性肿瘤早期多无明显症状，即便有症状也常无特异性，等患者出现特异性症状时，肿瘤常常已经属于晚期。因此，在前期对肿瘤细胞尽早地进行识别和检测是一项非常重要的课题和难题。

目前，用于肿瘤检查的方法主要有肿瘤标记物、基因检测、影像学检查等，虽然这些方法在辅助诊断和判断预后方面有一定的价值，但是缺乏特异性、成本高，没有确诊意义。目前具有确诊意义的检查手段是进行病理学检查，但是病理学检查这种方法多数情况下只能做出细胞学定性诊断，甚至有时诊断困难。同时，各类活检均有促使恶性肿瘤扩散的潜在可能性，需要在术前短期内或术中施行，无法在肿瘤发展前期进行检测。

在生物体内，活性氧(reactive oxygen species，简称ROS)，例如超氧阴离子O₂^-和羟自由基HO·可通过酶催化和非酶促反应等各种途径不断地产生。在线粒体的氧化磷酸化过程中，电子通过呼吸链传递被认为是细胞内ROS的主要来源，并且可能在肿瘤细胞的ROS应激中发挥重要作用。ROS可以作为细胞信号转导途径中的信使，并且适量增加某些ROS，比如超氧化物和过氧化氢，可能会促进细胞的生长/增殖以及促进肿瘤发展。与正常细胞相比，由于肿瘤因子刺激、代谢活动增加和线粒体功能障碍等，肿瘤细胞中与肿瘤转化相关的氧化应激增加，代谢活动发生改变，ROS的产生也增加。研究表明，与正常细胞相比，通常肿瘤细胞的氧化应激会增加。例如1987年，A.A.Konstantinov等人就研究了肝癌细胞中线粒体颗粒产生的发现肝癌细胞线粒体中超氧化物的产生率明显高于正常肝细胞线粒体的水平。因此，构建一种高度敏感性、高度特异性和可重复的基于细胞内ROS水平评估的肿瘤细胞检测试剂盒，不仅能够极大地提高临床肿瘤患者的诊断水平，还能够为肿瘤的预后评估、用药筛选及个体化治疗提供帮助。

发明内容

本发明的目的在于提供一种试剂盒、肿瘤细胞检测方法及其应用，用以克服上述背景技术中的肿瘤早期识别和检测存在的技术问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供一种试剂盒，包括A液和B液，所述A液中含有环三磷腈掺杂石墨烯量子点，所述B液为PBS缓冲液。

进一步地，所述A液由0.1-100ug的环三磷腈掺杂石墨烯量子点粉末溶于1mL水中形成，所述B液中PBS的浓度为0.01M。

进一步地，所述环三磷腈掺杂石墨烯量子点的横向尺寸为2-40nm。

相应地，本发明提供一种肿瘤细胞检测方法，该肿瘤细胞检测方法使用上述的试剂盒进行肿瘤细胞检测，该肿瘤细胞检测方法包括以下步骤：

提供试剂盒和血液样本；

抗凝处理并离心所述血液样本，得到第一沉淀物；

加入B液重悬所述第一沉淀物，得到第一重悬液；

加入A液孵育，得到混合物；