[发明专利]特定凝集素在制备用以鉴别肺癌分期的测试工具方面的用途以及装置

说明书

本发明提出了一种特定凝集素在制备用以鉴别肺癌分期的测试工具方面的用途以及装置。针对取自支气管肺泡灌洗液的样本，所述特定凝集素可分为三组：a组有RCA120、MAL‑II、EEL、PHA‑E、DBA、AAL；b组有PTL‑II、LCA、SJA、WFA、WGA；c组有PWM、VVA、GSL‑I。通过所述特定凝集素能够快速检测出差异性表达的糖蛋白糖链结构，确定受试者属于肺部良性病变、早期肺癌或晚期肺癌。本发明采用支气管肺泡灌洗液作为待检测物，由于其是从原发病灶、临近肿瘤细胞直接获取的样本，其具有高器官特异性，能直接反映患者身体的真实状况，且安全微创。

技术领域

本发明涉及一种基于糖蛋白糖型鉴别肺癌分期的技术，具体涉及特定凝集素在制作这方面测试工具的用途以及相应的装置。

背景技术

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康，其发病率和致死性均居各恶性肿瘤榜首。《2018年全球癌症统计数据》和《2014年中国癌症的发病率和死亡率》报告显示，肺癌的发病率和死亡率占总癌症发病人口的11.6％和18.4％(全球)、20％和27.3％(中国)。

肺癌通常可分为非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)和小细胞肺癌 (Small cell lung cancer，SCLC)。而根据病理学特征不同，NSCLC主要包括肺腺癌(Adenocarcinoma，ADC)和肺鳞癌(Squamous carcinoma，SCC)。肺癌早期临床症状的隐匿性，导致多数(57％)患者就诊时疾病已进展至晚期。由于较晚的诊断，肺癌的整体生存率较低，据统计，我国肺癌整体5年生存率仅为16.1％。目前应用于临床肺癌诊断的方法主要有影像学、细胞组织病理学及血清学指标检查，但因其不同程度的存在检出率低、高假阳性率、取材难度大或诊断效能不高等问题，临床实际应用效果欠理想，尤其早期诊断价值有限。支气管肺泡灌洗技术(BAL)是近几年在纤维支气管镜应用基础上发展起来的，为呼吸系统病变的诊断和疗效观察开辟了一条新途径。用于呼吸系统疾病诊断的支气管肺泡灌洗液(BALF)标本通过肺段、亚肺段灌洗术取得，可获得纤维支气管镜所不能探及的细胞学标本，提高癌细胞的检出率。肿瘤标志物是肿瘤细胞在发生、发展过程种中分泌、产生的一些化学活性物质，而且可通过肿瘤细胞分泌、释放于体液中，其实质反映了肿瘤的自身存在。研究认为，BALF中肿瘤标志物出现早、浓度高，是因为肺癌细胞分泌及代谢物首先进入支气管肺泡，后进入血循坏的缘故，且是从原发病灶获取的标本。目前已对肺癌患者BALF中的临床传统肿瘤标志物进行研究，认为其检测敏感性及特异性均高于血清学检测并在临床上广泛应用。

蛋白质的糖基化修饰广泛地存在于各种生物体中，是一种重要的翻译后修饰作用。有研究发现，异常糖基化的形成是肿瘤细胞恶性转变的一个关键特征，其反映了细胞表观遗传和参与多糖生物合成的基因异常表达。与健康组织相比，病变组织有例如很高程度的N- 糖链的分支型的变化、异构的岩藻糖基化、唾液酸化等糖基化变化，它们都可以作为某种疾病发生的生物指标。肿瘤糖基化的异常表达不是随机的，而是以常见的糖基化模式出现，其中甲胎蛋白(AFP)的岩藻糖基化的改变，对于检测高风险肝癌具有很高的敏感度。因此，将相关的糖蛋白用于精确诊断一些潜在的可能发展成为癌症的疾病，可被推广应用于发现糖链相关的生物标志物。在肺癌中己经发现很多异常糖基化，包括表达的改变、黏蛋白的糖基化、N-糖链分支类型改变、蛋白或糖脂上唾液酸化的增加等，但这些研究多集中在肺癌患者的组织或血清中。如何在保证特异性和灵敏度的前提下，尽量使用创伤低、易于获取的样本，拓展更多样本类型的研发工作是非常重要的。

凝集素芯片作为一种微阵列技术，凭借高通量、可重复性高、检测微量化、高度敏感及适用性广泛等优点，成为研究糖蛋白糖链结构变化最有效的分析工具之一，能够直接通过微量的原始样本快速、高灵敏地分析鉴定糖链，反映出样本中糖蛋白糖链最真实的状况。

发明内容

本发明通过大量的实验和分析，最终确立了针对支气管肺泡灌洗液作为待检测物，特定凝集素(组合)能够用来确定受试者肺癌分期情况。具体来说：