[发明专利]一种间充质干细胞及其外泌体和其在治疗肛瘘中的应用

权利要求书

1.一种间充质干细胞外泌体(EXO-ADSCs)，其特征在于，其提取方法，包括以下步骤：取扩增第3代间充质干细胞培养上清，1000rpm离心4～6min，吸出上清液转移至新的离心管中，10000×g离心8～15min，吸出上清液转移至新的离心管中，超速离心120000×g离心150～200min，或者按照外泌体提取试剂盒说明得到外泌体沉淀，即可得到间充质干细胞外泌体。

2.如权利要求1所述的间充质干细胞外泌体，其特征在于，其为应用自体脂肪来源的间充质干细胞外泌体。

3.一种治疗肛瘘的混合制剂，其特征在于，其主要成分包括权利要求1或2所述的间充质干细胞外泌体及其间充质干细胞。

4.如权利要求3所述的治疗肛瘘的混合制剂，其特征在于，包括以下有效成分：间充质干细胞、间充质干细胞外泌体、自体富血小板血浆和合成抑菌多肽。

5.如权利要求4所述的治疗肛瘘的混合制剂，其特征在于，所述的PRP的制备方法，包括以下步骤：抽取患者本人20～50ml外周血加入2～10ml抗凝剂，转移至50ml离心管中，以300g/min离心20～30min，吸取上层血浆、中间白膜层和少量红细胞至新的50ml离心管中；然后以700～800g/min，离心10min，吸出上清至新的离心管备用，使用该上清液调整血小板浓度至500～1000×10⁶个/mL，即为PRP。

6.如权利要求4或5所述的治疗肛瘘的混合制剂，其特征在于，其制备方法，包括以下步骤：

A、取扩增3代的间充质干细胞，经胰酶替代物消化后，转移至50ml离心管以300g/min离心10min，去上清，再加入生理盐水重悬细胞悬液，以300g/min离心10min，重复2次；

B、加入10ml生理盐水重悬细胞，吹打混匀，取样50μl左右的细胞悬液，用来计算细胞数量、活率，剩余细胞再次以300g/min离心10min；

C、调整细胞密度至2～5×10⁷个/ml，每ml细胞悬液加入1ml PRP、100μl外泌体和100μl抑菌多肽，即得到治疗肛瘘的干细胞混合制剂。

7.如权利要求3-6任一所述的治疗肛瘘的混合制剂，其特征在于，该混合制剂，使用前10～20min，加入凝血酶和钙离子溶液，进行激活形成PRP凝胶，为干细胞生长提供支撑。

8.如权利要求7所述的治疗肛瘘的混合制剂，其特征在于，所述的钙离子溶液为葡萄糖酸钙溶液或者氯化钙溶液。