[发明专利]表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP蛋白的重组猪伪狂犬病病毒及应用

说明书

本发明提供一种表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP蛋白的重组猪伪狂犬病病毒及应用。本发明利用Crispr/Cas9基因编辑技术和Cre/lox重组系统快速编辑PRV病毒株基因组，将其毒力基因gE、gI和TK定点缺失，并在gG位置定点插入NADC30‑like株的抗原基因。本发明首次选用流行PRRSV毒株PRRSV NADC30‑like的GP3、GP4、GP5和GP6蛋白的非跨膜区域编码序列作为抗原基因，抗原种类更加全面，对当前PRRSV疫情有更强的针对性，且免疫保护效果更强。本发明提供的活疫苗能够更有针对性地保护靶动物不受PRV和PRRSV的侵害，为我国猪伪狂犬病和蓝耳病的疫情防控提供有力工具。

技术领域

本发明属于生物技术和预防兽医领域，具体地说，涉及一种表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP蛋白的重组猪伪狂犬病病毒及应用。

背景技术

伪狂犬病病毒(pseudorabies virus，PrV)是引起多种动物共患的伪狂犬病的病原。猪是PRV的自然宿主，其它多种动物也可被感染。该病对猪呈爆发流行，可导致母猪繁殖障碍和新生仔猪大量死亡。目前防治伪狂犬病主要靠疫苗接种。PRV Bartha-K61株是二十世纪六十年代由Bartha等人将分离得到的PRV野毒株通过鸡胚成纤维细胞传代获得的一个人工致弱疫苗株，其毒力大大减弱，且免疫原性好，在国内外已应用数十年，在防制伪狂犬病中发挥了重要作用。然而，病毒具有变异的特性，利用Bartha-K61构建的重组病毒疫苗株已不能够很好地预防现行变异PRV病毒引起的疫情。

猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductive and respiratorysyndrome virus，PRRSV)引起的一种传染病，以母猪发热、厌食、早产、流产、死胎、弱仔等繁殖障碍及猪的呼吸系统疾病和高死亡率为主要特征。该病危害严重，并且目前缺少有效的防治措施。

因此，亟需开发利用重组病毒制备的弱毒疫苗，以更好地防御现行流行PRV和PRRSV引起的疫病。

发明内容

本发明的目的是提供一种表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP蛋白的重组猪伪狂犬病病毒及应用。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP蛋白的重组猪伪狂犬病病毒，其为重组猪伪狂犬病病毒PRV SDN8-TK^-/gE^-/gI^-/gG^--GP⁺，该毒株现已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号CCTCC NO:V201960，保藏日期2019年8月22日。

第二方面，本发明提供一种组合物，其包含所述的重组猪伪狂犬病病毒和药学上可接受的载体。

第三方面，本发明提供一种免疫原性组合物，其包含上述组合物。

第四方面，本发明提供一种疫苗组合物，其包含上述免疫原性组合物。

第五方面，本发明提供一种包含所述重组猪伪狂犬病病毒的基因工程疫苗。

第六方面，本发明提供所述基因工程疫苗的制备方法，包括如下步骤：

(1)将所述重组猪伪狂犬病病毒接种至易感细胞进行培养，得到病毒液；

(2)收获步骤(1)得到的重组猪伪狂犬病病毒。

第七方面，本发明提供以所述重组猪伪狂犬病病毒或上述组合物为免疫原制备的特异性抗体。

第八方面，本发明提供所述重组猪伪狂犬病病毒的以下任一应用：

1)用于制备治疗或预防猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪伪狂犬病毒感染以及由其感染所致相关疾病的疫苗或药物；

2)用作疫苗载体。