[发明专利]一种犬瘟热弱毒株及其制备的疫苗组合物和应用

说明书

本发明提供了犬瘟热病毒弱毒株HL001‑M3株，其具有良好的免疫原性，遗传稳定，低毒，制备的活疫苗能预防和治疗犬瘟热，针对流行株进行保护，并能对多种动物进行保护。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种犬瘟热弱毒株及其制备的疫苗组合物和应用。

背景技术

犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)是属于副黏病毒科麻疹病毒属的单股RNA病毒，病毒粒子呈圆形或不整形。近年来，伴随着生态环境的变化及动物和病毒的进化，CDV的自然感染宿主已由传统的犬科(包括犬、狐狸、貉子等)、浣熊科和鼬科(水貂等)动物扩展到食肉目所有8个科及偶蹄目猪科、灵长目猕猴属和鳍足目海豹科等多种动物，并且呈现不断扩大的趋势。

犬瘟热(Canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒感染引起的犬科、鼬科、浣熊科等动物的急性、热性、高度接触性传染病。其主要特征为双相型发热，眼、鼻、消化道等粘膜炎症，以及卡他性肺炎、皮肤湿疹和神经症状。该病是目前对我国养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的疫病之一，受到广泛重视。

目前国内外预防和控制犬瘟热所用疫苗中涉及的CDV毒株基因型均为上世纪30-40年代北美流行的北美Ⅰ型、经过弱化的传统CDV疫苗株，如Onderstepoort株、Snyder Hill株、Lederle株、Convac株，而现阶段国内主要流行的是亚洲I型CDV野毒株。这些传统的CDV疫苗株与国内近10年流行的CDV野毒株在基因型上具有较大差距，存在抗原针对性不强的缺陷，尤其近年来犬瘟热病毒不断变异、感染宿主不断扩大，从而导致国内犬瘟热疫情一直无法得到有效控制，研制既安全又有良好免疫原性的弱毒疫苗具有重要的现实意义。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种亚洲I型犬瘟热弱毒株，所述犬瘟热弱毒株具有安全性高和良好的免疫原性的特点，其制备的疫苗能够抵抗现有流行株感染，且对不同宿主的感染均有良好的预防和控制作用。

为此，本发明提供一种犬瘟热病毒弱毒株，其与其犬瘟热亲本强毒株相比，H蛋白氨基酸序列具有以下突变位点：H477L，R519I；其F蛋白氨基酸序列具有以下特征性位点：N209S，L390F。

本发明的犬瘟热病毒弱毒株其H蛋白氨基酸序列、F蛋白氨基酸序列发生的点突变，较亲本强毒株毒性降低，且具有遗传稳定性。

根据本发明，所述犬瘟热病毒弱毒株H蛋白如SEQ NO.1所示，所述犬瘟热病毒弱毒株F蛋白如SEQ NO.2所示。

作为本发明的一种实施方式，所述犬瘟热病毒弱毒株为犬瘟热病毒HL001-M3株，保藏号为CCTCC NO.V201940。

本发明提供的犬瘟热病毒HL001-M3株，其中，所述犬瘟热病毒HL001-M3株(CanineDistemper Virus,Strain HL001-M3)保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO.V201940，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏日期为2019年6月19日。

致病性试验表明，犬瘟热病毒HL001-M3株培养1代至80代之间，对犬致病力显著降低。犬在接种后观察21天，不出现临床症状，剖检组织器官无变化。因此，该病毒与亲本强毒犬瘟热病毒HL001株相比，致病力显著降低，是人工致弱的病毒株。

免疫原性试验表明，犬瘟热病毒HL001-M3株培养至第80代，仍具有良好的免疫原性。犬在接种后21天，可抵御强毒犬瘟热病毒HL001株的攻击。同时，未接种HL001-M3株培养物的犬，则不能抵御犬瘟热病毒HL001株的攻击，全部发病。

病毒返强试验表明，培养1代至80代之间的病毒，接种后在犬群中连续接触传代多次，不发生返强。因此，病毒接种犬群后，不会重新演变为强毒而引发病，安全性有保证。