[发明专利]引物、检测Lactobacillus sp.的方法以及试剂盒

权利要求书

1.一种引物，其特征在于，所述引物特异性识别Lactobacillus sp.的基因，所述引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列为5′-TGCCACAAGGCTATCACCTC-3′；所述SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列为5′-AACTCTTGGCTTCGCTGACG-3′。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列为5′-TGCCACAAGGCTATCACCTCCTCATTTTGAGATGACAGATATAAGTATATCAAAAGTTTCCTTATAAGTGGTGTACTTTATCTTATAGTGTTTAGGTATACCAAAAGTTATTTTCCAGTAGCGCCTCATCTCACAACTTGCTATAATAGGGGCGAATAGACACGGGAAAGGAACTGATATGATGGTATTAACCAAAAAAGACATCGAAGATCTTTTTAACAAGGAACAGGGTCAATACAAGAAGGACGTCAGCGAAGCCAAGAGTT-3′。

3.一种检测Lactobacillus sp.的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

提取酒醅中的微生物，获得含有所述微生物的体系；

对所述含有所述微生物的体系依次进行DNA提取，获得所述含有所述微生物的体系对应的DNA；

对Lactobacillus sp.菌液进行浓度梯度稀释，并对不同浓度的所述Lactobacillussp.菌液进行DNA提取，获得每个浓度的所述Lactobacillus sp.菌液对应的DNA；

对所述每个浓度的所述Lactobacillus sp.菌液对应的DNA和所述含有所述微生物的体系对应的DNA分别进行荧光定量PCR检测，所述荧光定量PCR检测所需的引用为权利要求1所述的引物；

以所述Lactobacillus sp.菌液的浓度的对数为横坐标，以所述Lactobacillus sp.菌液的荧光定量PCR的检测结果为纵坐标，绘制标准曲线；

根据所述含有所述微生物的体系的荧光定量PCR的检测结果在所述标准曲线上的投点，计算酒醅中Lactobacillus sp.的含量。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述酒醅为白酒酒醅。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述提取所使用的抽提缓冲液包括：终浓度为180-200mmol/L的Tris，终浓度为50-60mmol/L的EDTA，终浓度为180-200mmol/L的NaCl，终浓度为8-12mmol/L的CaCl₂。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述提取酒醅中的微生物的步骤包括：

将所述酒醅与所述抽提缓冲液混合，在4-10℃条件下，以150-200转/分钟，震荡20-30min，8000-1000转/分钟离心，弃上清液，保留沉淀物，向所述沉淀物中加入所述抽提缓冲液，混匀后，进行至少依次冻融。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述酒醅与所述抽提缓冲液的比例为40-50g:100mL；所述沉淀物与所述抽提缓冲液的比例为40-50g:500mL。

8.一种检测酒醅中Lactobacillus sp.的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

权利要求1所述的引物；

权利要求5所述的抽提缓冲液；

Lactobacillus sp.菌液；

DNA提取试剂；以及

荧光定量PCR试剂。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照，所述阳性对照为含有Lactobacillus sp.基因片段的质粒DNA。