[发明专利]一种白细胞抗原B27检测方法及其应用

说明书

本发明涉及抗原检测技术领域，且公开了一种白细胞抗原B27检测方法，步骤二：在试管一中添加肝素0.5ml，然后再将试管一中加入采集的新鲜血液2.0ml，待肝素和血液加入之后，将试管一内部的肝素和血液摇匀，等待摇匀之后再将试管静置；步骤三：在步骤二中的试管一中继续添加淋巴细胞分离液2ml；步骤四：通过试管二取用抗凝血，并在试管试管二加入等量的1640营养液，待加入1640营养液之后将试管二震荡摇匀，摇匀之后将试管二中的液体缓慢的铺设于试管一淋巴细胞分离液的表面，最终再进行离心并静置。该白细胞抗原B27检测方法，检测效率高、操作简单，重复率高且无需特殊的贵重仪器设备。

技术领域

本发明涉及抗原检测技术领域，具体为一种白细胞抗原B27检测方法及其应用。

背景技术

随着医学诊断技术迅速发展，抗原检测手段也日新月异变化。发展至今，放射性免疫分析法、酶联免疫分析法和荧光免疫分析法这三大技术是免疫化学、免疫学以及分子生物学中应用最广的常规抗原分子检测手段。

HLA-B27是位于人第6号染色体HLA基因B座位的一个等位基因。强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)患者HLA-B27阳性率高达94％，而正常人群仅为9％。对疑似AS患者进行HLA-B27检测，已成为临床重要的辅助诊断手段。目前HLA-B27检测手段主要有血清学方法如微量淋巴细胞试验、流式细胞仪检测、ELISA法、引物特异性聚合酶链反应(SSP-PCR)等。

传统的血清学的微量淋巴细胞方法，检测效率低下，操作复杂，重复性较低，而且所使用的贵重的实验器材较多，因此增加了检测的成本。为此，本发明提出了一种白细胞抗原B27检测方法及其应用。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种白细胞抗原B27检测方法及其应用，具备检测效率高、操作简单，重复率高且无需特殊的贵重仪器设备等优点，解决了传统的血清学的微量淋巴细胞方法，检测效率低下，操作复杂，重复性较低，而且所使用的贵重的实验器材较多，因此增加了检测的成本的问题。

(二)技术方案

为实现上述的目的，本发明提供如下技术方案：一种白细胞抗原B27检测方法，具体步骤如下：

步骤一：试剂准备

1640营养剂HLA-B27标准血清盘补体淋巴细胞分离液肝素；

步骤二：在试管一中添加肝素0.5ml，然后再将试管一中加入采集的新鲜血液2.0ml，待肝素和血液加入之后，将试管一内部的肝素和血液摇匀，等待摇匀之后再将试管静置；

步骤三：在步骤二中的试管一中继续添加淋巴细胞分离液2ml；

步骤四：通过试管二取用抗凝血，并在试管试管二加入等量的1640营养液，待加入1640营养液之后将试管二震荡摇匀，摇匀之后将试管二中的液体缓慢的铺设于试管一淋巴细胞分离液的表面，最终再进行离心并静置；

步骤五：选取白细胞层，并将白细胞层放入试管三中，与此同时试管三中也会加入8ml的1640营养液，之后再将试三中的液体摇匀并离心；

步骤六：去掉上清液，将细胞震荡起来，之后再加入8ml的1640营养液，待1640营养液加入之后混匀并离心；

步骤七：去掉上清液，再将细胞震荡起来，之后加入1640营养液并将溶液调至1000个/ul；

步骤八：取HLA-B27标准血清盘一块，并在室温下进行融化，加入无菌水，将调至好的淋巴细胞悬液进行混匀；

步骤九：加入补体5ul，且放置在室温下孵育一段时间，之后再加入2％薯红3ul，最后将HLA-B27标准血清盘放入在冰箱中进行冷藏，且冷藏的温度为4摄氏度，待第二天后通过显微镜观察。