[发明专利]一种基于酶催化循环及二硫化钼吸附介导可视化检测核酸的方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的基于酶催化循环及二硫化钼介导吸附可视化检测核酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将巯基或polyA修饰的捕获序列组装在金纳米粒子表面，构建纳米金捕获探针；

（2）向含有目标核酸的待测体系中加入捕获探针，目标核酸与捕获探针完成杂交后向体系添加含有核酸外切酶III的反应液，进行循环剪切反应；

（3）向步骤（2）完成剪切反应后的体系中加入二硫化钼纳米片，静置反应；

（4）取步骤（3）反应后体系的上清液，肉眼观察上清液颜色的变化，并通过紫外分光光度计测量上清液的吸光值变化；

步骤（2）所述循环剪切反应为采用核酸外切酶III进行，所述核酸外切酶III的终浓度为0.1 U/μL，剪切时间为30 min；步骤（3）所述二硫化钼纳米片终浓度为15μg/mL；静置反应时间为70 min。

2.根据权利要求1所述的基于酶催化循环及二硫化钼介导吸附可视化检测核酸的方法，其特征在于，所述捕获序列通过加盐老化组装在金纳米粒子表面。

3.根据权利要求1所述的基于酶催化循环及二硫化钼介导吸附可视化检测核酸的方法，其特征在于，所述金纳米粒子的粒径为10-50 nm。

4.根据权利要求2所述的基于酶催化循环及二硫化钼介导吸附可视化检测核酸的方法，其特征在于，所述加盐老化为将polyA或巯基修饰的目标核酸捕获序列与金纳米粒子混合，在室温下轻摇过夜；分批多次加入PBS溶液，继续室温下轻摇过夜；离心去除多余的捕获序列，离心清洗，得到的捕获探针分散在PBS溶液中储存。

5.根据权利要求1-4任一所述的基于酶催化循环及二硫化钼介导吸附可视化检测核酸的方法，其特征在于，所述捕获序列为与待检测目标核酸互补的序列。

6.根据权利要求1所述的基于酶催化循环及二硫化钼介导吸附可视化检测核酸的方法，其特征在于，步骤（2）所述目标核酸与捕获探针的杂交时间为10-30 min。

7.根据权利要求1所述的基于酶催化循环及二硫化钼介导吸附可视化检测核酸的方法，其特征在于，步骤（3）所述二硫化钼纳米片的尺寸为100-300 nm*100-300 nm。