[发明专利]一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法

权利要求书

1.一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）用计算机设计软件AUTOCAD设计和绘制微流控的通道图形；

（2）利用设计的图形绘制掩模版，并且用标准的软光刻技术加工微流控聚二甲基硅氧烷PDMS芯片，微流控光电化学传感器由微流控底板，微流控上芯片，微流控下芯片，上芯片与下芯片之间的隔膜四部分组成，其中，微流控底板为氧化铟锡ITO导电玻璃，用做工作电极和键合微流控通道，微流控上芯片包括电极槽用于放对电极，参比电极，工作电极，进样口及微通道，清洗口及微通道，微流控下芯片包括工作电极槽，气体阀门口及微通道；

（3）将8 cm × 3 cm的ITO导电玻璃，依次用丙酮、乙醇和超纯水分别超声清洗30 min，氮气吹干；

（4）将20 µL、6.0 ~ 8.0 mg/mL的氧化锌ZnO溶液滴涂在ITO导电玻璃的导电面，室温下晾干，继续滴涂20 µL、3.0 ~ 5.0 mg/mL的碘氧铋/硫化铋BiOI/Bi₂S₃溶液，室温下晾干，再继续滴涂8 µL、2.0 ~ 4.0 mg/mL的聚多巴胺PDA，室温下晾干，得到ZnO/BiOI/Bi₂S₃/PDA修饰的ITO导电玻璃；

（5）将上述步骤（2）中制备的微流控下芯片和步骤（4）中ZnO/BiOI/Bi₂S₃/PDA修饰的ITO导电玻璃一起进行氧气等离子体处理，然后将微流控下芯片与ITO导电玻璃键合，再将其和上芯片与下芯片之间的隔膜一起进行氧气等离子体处理并进行键合，继续将其和微流控上芯片一起进行氧气等离子体处理，并进行键合，即完成微流控芯片制备；

（6）通过B型利钠肽捕获抗体进样口用注射泵以10 ~ 30 µL/min注射10 µg/mL的B型利钠肽捕获抗体Ab₁到工作电极槽中，4 ℃冰箱中孵育40 ~ 60 min，缓冲溶液进样口注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi₂S₃/PDA/Ab₁；

（7）通过牛血清蛋白进样口用注射泵以10 ~ 30 µL/min注射质量分数为0.1 ~ 1.0 %的牛血清蛋白BSA溶液到工作电极槽中，以封闭电极表面上未结合Ab₁的非特异性活性位点，4 ℃冰箱中晾干，缓冲溶液进样口注射缓冲溶液进行洗涤，得到ZnO/BiOI/Bi₂S₃/PDA/Ab₁/BSA；

（8）通过B型利钠肽抗原进样口用注射泵以10 ~ 30 µL/min注射0.1 pg/mL ~ 200 ng/mL不同浓度的B型利钠肽抗原BNP标准溶液到工作电极槽中，4℃冰箱中孵育40 ~ 60 min，缓冲溶液进样口注射缓冲溶液进行洗涤，制得修饰完全的ZnO/BiOI/Bi₂S₃/PDA/Ab₁/BSA/BNP微流控光电化学传感器，即一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器。

2.如权利要求1所述的一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，电极槽直径为2000 ~ 3000 µm，连接三电极的微通道宽度为800~ 900 µm，进样口直径为1000 ~ 1200 µm，进样通道宽度为600 ~ 800 µm，清洗微通道宽度为800 ~ 1000 µm，气体阀门微通道宽度为1000 ~ 1200 µm，气体阀门口直径为1000 ~1200 µm，微流控微通道的进口和出口均具有弧度设计，保证液体流畅通过。

3.如权利要求1所述的一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述光电化学的三电极集成于小型微流控传感器上。

4.如权利要求1所述的一种用于心衰标志物B型利钠肽检测的微流控光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述ITO导电玻璃为工作电极，同时也是微流控芯片的底板。

5.如权利要求1所述的制备方法得到微流控光电化学传感器用于心衰标志物B型利钠肽的检测方法，其特征在于，所述检测的具体步骤如下：

(1) 使用电化学工作站以三电极体系进行测试，将参比电极和对电极分别插入电极槽1和3，将pH=7.4含0.1 mol/L抗坏血酸的缓冲溶液PBS通过抗坏血酸的缓冲溶液进样口注入，并且充满电极槽，在LED灯照射下进行测试；

(2) 用时间-电流法对B型利钠肽进行检测，设置电压为0.1 V，运行时间200 s；

(3) 当背景电流趋于稳定后，每隔10 ~ 20 s开灯持续照射10 ~ 20 s，然后记录光电流变化，绘制工作曲线；

(4) 用血清样品溶液代替B型利钠肽抗原标准溶液，检测结果通过工作曲线查得。