[发明专利]一种海参卵源八肽及其钙纳米复合物的制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种海参卵源八肽及其钙纳米复合物的制备方法与应用，所述海参卵源八肽的氨基酸序列如下所示：Glu‑Asp‑Leu‑Ala‑Ala‑Leu‑Glu‑Lys，分子量887.97Da。本发明所述海参卵源八肽使用多肽合成仪，采用固相合成法合成、高相液相色谱纯化、冷冻干燥而得。所述海参卵源八肽与Ca²⁺以1:1的摩尔比，通过C端谷氨酸和天冬氨酸的羧基氧原子结合，形成海参卵源八肽‑钙纳米复合物，与海参卵源八肽结合的Ca²⁺浓度为2mM，经Caco‑2细胞单层膜转运时间120min时，Ca²⁺转运量为41.99±3.55μg/mL；可增强Ca²⁺的递送能力，用于功能性保健品、营养强化食品等领域。

技术领域

本发明涉及功能性保健品、营养强化食品等领域，具体涉及一种海参卵源八肽及其钙纳米复合物的制备方法与应用。

背景技术

钙约占人体体重的1.5～2.2％，是人体内最丰富的无机元素。缺钙可诱发代谢性骨病，例如骨质疏松症和佝偻病。研究发现，50岁以上的中国女性中，超过三分之一的人预计会患上骨质疏松症。人们普遍认为钙和维生素D的结合在补钙过程中起到了很好的作用。然而最新临床研究发现，无论是补充钙剂，维生素D，还是钙剂/维生素D联合补充均不能降低50岁以上居住在社区的中老年人骨折的发生率，甚至大剂量补充维生素D还增加了骨折发生的风险。值得注意的是，临床试验中使用的补钙制剂通常为碳酸钙、柠檬酸钙和维生素D等无机或有机钙盐。此外，许多实验研究发现，许多无机和有机钙产品可在胃肠道环境中形成沉淀物，降低其生物利用度。

越来越多的研究表明，食源性钙离子结合肽可以作为一种有效的纳米载体运输钙离子，促进机体对钙的吸收。小分子的钙离子结合肽具有显著的优越性，其分子量小，易于修饰和改造，能够通过人工化学合成，在吸收通道和吸收速度上也具有氨基酸无可比拟的优越性。对于钙补充剂而言，食源性钙离子结合肽已成为近年来的一个研究热点，因为它们已被证明具有良好的营养价值及补钙功能。

发明内容

本发明的目的是提供一种经肽组学技术从海参卵胰蛋白酶水解物中获得的，具有自组装形成肽钙纳米复合物及促进钙离子吸收功能的海参卵源八肽，可应用于功能性保健品、营养强化食品等领域。本发明以Caco-2单层细胞转运模型来评价海参卵源八肽递送钙离子的功能。

一种海参卵源八肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，缩写为EDLAALEK，分子量887.97Da，序列为：Glu-Asp-Leu-Ala-Ala-Leu-Glu-Lys；其中，

Glu表示英文名称为Glutamic acid，中文名称为谷氨酸的氨基酸的相应残基；

Asp表示英文名称为Aspartic acid，中文名称为天冬氨酸的氨基酸的相应残基；

Leu表示英文名称为Leucine，中文名称为亮氨酸的氨基酸的相应残基；

Ala表示英文名称为Alanine，中文名称为丙氨酸的氨基酸的相应残基；

Lys表示英文名称为Lysine，中文名称为赖氨酸的氨基酸的相应残基。

本发明所述的氨基酸序列采用标准Fmoc方案，通过树脂的筛选，合理的多肽合成方法。将目标多肽的C-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这个氨基酸的氨基作为起点，与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键。不断重复这一过程，即可以得到目标多肽产物。合成反应完成后，去除保护基，将肽链与树脂分离，即得到目标产物。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序从C端向N端合成。合成完毕，采用高效液相色谱进行纯化，液氮速冻，真空冷冻干燥，得到多肽成品。