[发明专利]纳米复合材料、LPS电化学适体传感器的制备方法及检测方法

权利要求书

1.一种用于脂多糖LPS检测的电化学DNA适体传感器，其特征在于，由以下方法制备得到，该方法包括以下步骤：

1)用20mM pH＝7.4的Tris-HCl缓冲液室温下处理氨基标记的LPS结合适体，储存备用；

2)将金电极用食人鱼洗液浸泡30min后用超纯水冲洗干净备用；所述食人鱼洗液为98％H₂SO₄/30％H₂O₂＝3∶1，v/v；

3)将步骤2)得到的电极分别用0.3μm和0.05μm的Al₂O₃粉末抛光呈镜面，然后分别按超纯水、无水乙醇、超纯水的顺序超声处理电极，干燥备用；

4)将步骤3)得到的电极在0.5M H₂SO₄中进行电化学活化，然后用超纯水冲洗，干燥；

5)将10μL的P-rGO-TNT-Ag纳米复合材料溶液滴加到步骤4)清洁的金电极表面上，室温干燥；

6)将20μL步骤1)制得的LPS结合适体，滴加在步骤5)制备得到的电极上室温孵育15h；

7)将20μL 1％BSA溶液滴加到步骤6)得到的电极上室温孵育40min，即得到用于LPS检测的电化学DNA适体传感器；

所述P-rGO-TNT-Ag纳米复合材料溶液由如下步骤制备得到：(1)制备rGO分散液；(2)制备P-rGO分散液；(3)制备TiO₂纳米管TNTs分散液；(4)制备TNT-Ag分散液；(5)将(4)制得的TNT-Ag分散液加入(2)制得的P-rGO分散液中，然后在室温下搅拌24h，离心、洗涤，再将沉淀物分散在超纯水中，即得到P-rGO-TNT-Ag纳米复合材料溶液；所述步骤(1)中rGO分散液的制备方法为：将10mg GO分散在25mL超纯水中，超声均匀，然后滴加20μL氨水使pH在8～9，再向其中加入250mg抗坏血酸AA，室温搅拌0.5h后在95℃ 油浴下继续搅拌1h，离心、洗涤，再将沉淀物分散在10mL超纯水中，即得到rGO分散液；所述步骤(2)中P-rGO分散液的制备方法为：将20μL 20wt％聚二烯丙基二甲基氯化铵PDDA溶液滴加到1mL步骤(1)制得的rGO分散液中，搅拌0.5h，得到P-rGO分散液；所述步骤(3)中TiO₂纳米管TNTs分散液的制备方法为：将1g TiO₂粉末加入20mL 10mol/L NaOH溶液中，室温搅拌1h，然后将该溶液转移到反应釜中130℃ 反应10h，冷却，离心、用1M HCl溶液洗涤至pH＝1、再用超纯水洗涤至pH＝7，然后将沉淀物分散在10ml超纯水中，即得到TNTs分散液；所述步骤(4)中TNT-Ag分散液的制备方法为：取1mL步骤(3)制得的TNTs分散液用超纯水稀释至5mL，然后加入1mL 8.5mg/mL AgNO₃溶液，搅拌5min，再向其中加入1mL 3mg/mL NaBH₄溶液，继续搅拌1h，离心、洗涤，再将沉淀物分散在5mL超纯水中，即得到TNT-Ag分散液。

2.一种利用电化学DNA适体传感器检测脂多糖LPS的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)向权利要求1所述的适体传感器的电极上滴加不同浓度的目标物内毒素；

b)将电极置于0.1M pH＝7.0的PBS溶液中进行表征，测量其电流变化值；

c)根据步骤b)所得电流变化值与LPS浓度对数值的线性关系，绘制工作曲线；

d)将待测样品用权利要求1所述的适体传感器检测，将得到的电流值通过步骤c)制得的工作曲线计算得到待测样品的LPS浓度。