[发明专利]一种猪瘟病毒抗体检测试剂盒

权利要求书

1.一种猪瘟病毒抗体检测试剂盒，包含试剂R1和试剂R2，其特征在于：所述试剂R1为pH6.0-8.0的缓冲液，其包括稳定剂、高分子加速剂、表面活性剂和防腐剂；所述试剂R2为猪瘟病毒抗原胶乳试剂，其包括稳定剂、猪瘟病毒E2抗原胶乳颗粒、防腐剂和缓冲液。

2.根据权利要求1所述的猪瘟病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：

所述试剂R2的猪瘟病毒E2抗原胶乳颗粒为标记有猪瘟病毒E2重组抗原的粒径为60±1.5nm的金纳米颗粒。

3.根据权利要求2所述猪瘟病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R2的由以下方法制备而成：

步骤1)，扩增猪瘟病毒E2基因基因序列，通过clonExpress技术连入真核表达载体pEGFP-C1载体；将上述重组质粒通过DEAE-葡聚糖法转染猪肾上皮细胞PK-15，培养后高压破碎细胞，将细胞上清进行亲和层析法纯化鉴定，获得猪瘟病毒E2蛋白；

步骤2)，取100mL纳米金溶液用1％K₂CO₃调节pH至7.5-10.0，按一定比例缓慢加入猪瘟病毒E2重组蛋白，在磁力搅拌器下反应10min，加入BSA溶液至最终浓度为1％，继续搅拌5min得到猪瘟病毒E2抗原胶乳颗粒，4℃过夜；

步骤3)，将猪瘟病毒E2抗原胶乳颗粒以3000rpm离心30min；去除聚合凝集杂质，再以12000rpm、4℃离心30min，弃上清，用重悬液(含有1％BSA的0.01M PBS溶液)复溶，重复洗涤3次；收集沉淀，用含稳定剂、防腐剂的缓冲液重悬，沉淀，调整浓度至OD_540nm为0.2，分装即得。

4.根据权利要求3所述猪瘟病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述步骤2)中，纳米金与猪瘟病毒E2重组蛋白质量比为1:0.8-1:1.6。

5.根据权利要求3所述猪瘟病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：所述步骤2)中纳米金溶液由以下方法制备而成：在清洗干净的圆底烧瓶中加超纯水100mL，加入1％氯金酸溶液1mL，600rpm高速搅拌并加热至溶液沸腾，迅速加入1％柠檬酸三钠溶液1.5mL，继续加热和搅拌10min，溶液颜色先变黑后变红，停止加热并继续搅拌10min，然后停止搅拌恢复至室温并用超纯水恢复至100mL；制得纳米金溶液，超滤去掉小分子备用。

6.根据权利要求1～5任一项所述猪瘟病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：

所述试剂R2的缓冲液包括磷酸盐缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris-Cl缓冲液、HEPS缓冲液中的一种或多种；

所述试剂R2的稳定剂包括小牛血清、BSA、脱脂乳、明胶、蔗糖、甘油中一种或几种；

所述试剂R2的防腐剂包括叠氮钠、苯酚、Proclin、对羟基苯甲酸中的一种或几种。

7.根据权利要求6所述猪瘟病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：

所述试剂R2的稳定剂为质量体积比10-20％蔗糖、质量体积比0.5-2％BSA和质量体积比3-10％甘油；

所述试剂R2的防腐剂为质量体积比0.1-0.5％的Proclin300；

所述试剂R2的缓冲液为pH6.0-8.0的磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求1所述猪瘟病毒抗体检测试剂盒，其特征在于：

所述试剂R1的缓冲液包括磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液中的一种或几种；

所述试剂R1的稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种；

所述试剂R1的防腐剂包括叠氮钠、苯酚、Proclin、对羟基苯甲酸中的一种或几种；

所述试剂R1的高分子加速剂包括聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、聚乙二醇中的一种或几种；

所述试剂R1的表面活性剂包括Triton系列、Tween系列、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚中的一种或几种。