[发明专利]一种用于检测男性人类基因组DNA的DNA片段和引物对

说明书

本发明公开了一种用于检测男性人类基因组DNA的DNA片段和引物对。本发明公开的用于检测男性人类基因组DNA的DNA片段，其序列为序列表中序列8，引物对由序列表中序列6和7所示的两条单链DNA组成。实验证明，利用本发明DNA片段可以检测男性人类基因组DNA，且检测的灵敏度高，可达0.128pg/μl，且可在10ng/μl‑0.128pg/μl的男性人类基因组DNA浓度区间内进行准确定量。表明，利用本发明的DNA片段乙，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，一种用于检测男性人类基因组DNA的DNA片段和引物对。

背景技术

现有的基于荧光定量PCR的男性人类基因组DNA定量方法主要选用单拷贝基因，拷贝数在人群中分布一致性高。但由于拷贝数少，定量检测灵敏度较低，难以准确检测DNA浓度低于10ng/μl的反应体系，所以目前急需一种可以检测更低浓度的男性人类基因组DNA的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测男性人类基因组DNA的遗传标记物，并解决了现有定量检测方法检测男性人类基因组DNA的灵敏度低及适用样本DNA浓度范围窄的问题。

本发明首先提供了名称为DNA片段乙的DNA片段在检测男性人类基因组DNA中的应用；所述DNA片段乙为序列表中序列8所示的DNA片段或其任一片段。

本发明还提供了检测所述DNA片段乙的物质在检测男性人类基因组DNA中的应用。

检测所述DNA片段乙的物质在制备检测男性人类基因组DNA产品中的应用，也属于本发明的保护范围。

以所述DNA片段乙作为男性人类遗传标记物的检测男性人类基因组DNA方法中所用物质在检测男性人类基因组DNA中的应用，也属于本发明的保护范围。

所述DNA片段乙作为男性人类遗传标记物在检测男性人类基因组DNA中的应用，也属于本发明的保护范围。

上文中，所述检测所述DNA片段乙的物质可包括名称为引物对C的引物对；所述引物对C由序列表中序列6和7所示的两条单链DNA组成。

所述检测所述DNA片段乙的物质还可包括进行PCR扩增或进行实时荧光定量PCR所需的其他物质。

所述检测所述DNA片段乙的物质可仅由所述引物对C组成，也可由引物对C与进行PCR扩增或进行实时荧光定量PCR所需的其他物质组成。

所述物质可为试剂盒。

本发明还提供了检测男性人类样本的方法，所述方法包括：利用所述检测所述DNA片段乙的物质检测待测样本的基因组DNA中是否含有所述DNA片段乙，确定所述待测样本是否含有男性人类样本或是否为男性人类样本：如所述待测样本的基因组DNA中含有所述DNA片段乙，所述待测样本含有或候选含有男性人类样本或为或候选为男性人类样本；如所述待测样本的基因组DNA中不含有所述DNA片段乙，所述待测样本不含或候选不含男性人类样本或不为或候选不为男性人类样本。

上述方法中，所述检测待测样本的基因组DNA中是否含有所述DNA片段乙可采用荧光定量PCR进行。

本发明还提供了定量检测男性人类基因组DNA的方法，包括：采用荧光定量PCR的方法，利用所述引物对C检测不同浓度男性人类基因组DNA标准品，得到不同浓度男性人类基因组DNA标准品的Ct值，确定Ct值和男性人类基因组DNA浓度间的关系；利用所述引物对C检测待测样本，得到所述待测样本的Ct值，根据Ct值和男性人类基因组DNA浓度间的关系以及所述待测样本的Ct值确定所述待测样本中男性人类基因组DNA的含量。

确定Ct值和男性人类基因组DNA浓度间的关系可为工作曲线1或工作曲线3，所述工作曲线1为y＝-1.396ln(x)+26.531，所述工作曲线3为y＝-1.45ln(x)+29.416，x为男性基因组DNA浓度，y为Ct值。