[发明专利]一种固液相结合制备维拉卡肽的方法

说明书

本发明公开了一种固液相结合制备维拉卡肽的方法，采用固液相结合的方式，选择价格低廉的侧链保护氨基酸与酸敏感固相载体树脂合成主链肽树脂，选择性去除Cys侧链的保护基和树脂，活化主链Cys巯基，再与价格低廉的L‑Cys‑OH直接反应，最后裂解脱除Arg保护基得到维拉卡肽。合成杂质少，收率高，易于纯化，原料便宜易得，合成成本低，适合大规模生产。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种固液相结合制备维拉卡肽的方法。

技术背景

继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT，简称继发性甲旁亢)，是指在慢性肾功能不全、肠吸收不良综合征、Fanconi综合征和肾小管酸中毒、维生素D缺乏或抵抗以及妊娠、哺乳等情况下，甲状旁腺长期受到低血钙、低血镁或高血磷的刺激而分泌过量的甲状旁腺激素(PTH)，以提高血钙、血镁和降低血磷的一种慢性代偿性临床表现，长期的甲状旁腺增生最终导致形成功能自主的腺瘤。

维拉卡肽，英文名称Etelcalcetide，是一种钙敏感受体激动剂，由AMGEN INC的全资子公司Kai Pharmaceuticals Inc.开发，用于治疗成人慢性肾病患者做血液透析治疗引发的继发性甲状旁腺功能亢进，它可结合并激活甲状旁腺上的钙敏感受体，实现甲状旁腺激素(PTH)水平的降低。该药于2017年2月7日获得美国FDA批准上市，是12年来首个获批的用于治疗透析患者继发性甲状旁腺功能亢进的药物，其有效性及安全性优于已上市的同类产品西那卡塞。

维拉卡肽的结构如下所示：

该化合物合成的关键在于分子间二硫键的构建，在目前关于该化合物的制备方法中，专利文献CN105504012公开了一种固相合成维拉卡肽的方法，先固相合成主链肽树脂，再选择性脱除Cys侧链保护基，接着与Y-Cys(NPys)-OH反应合成全保护肽树脂，最后裂解、纯化得到维拉卡肽。其中，氨基酸物料Y-Cys(NPys)-OH本身成本昂贵，并且固相合成形成二硫键时用量大，不易控制。专利文献CN108218957公开了一种固液相结合合成维拉卡肽的方法，选择酸敏感的氨基树脂合成主链肽树脂，再在稀酸裂解液下去除Cys侧链的Mmt保护基和树脂，同时加入Boc-Cys(NPys)-OH形成二硫键，最后裂解脱除Arg保护基纯化得到产品。其中，氨基酸物料Fmoc-D-Cys(Mmt)-OH和Boc-Cys(NPys)-OH价格昂贵，合成成本高，缺乏实用性。专利CN106795201公开了一种固液相结合制备维拉卡肽的方法，先固相合成主链肽树脂，再切割所述肽，并用2,2-二硫二吡啶活化Cys侧链巯基，再与L-Cys-OH反应，纯化得维拉卡肽。其中，主链Cys和Arg侧链保护基同时裂解时，产生杂质较多，收率低。

综合上述文献，现有的维拉卡肽的制备方法杂质多，氨基酸物料价格昂贵，合成成本高，不利于工业大规模生产。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种新的固液相结合制备维拉卡肽的方法，该方法能有效降低合成杂质，降低生产成本，有利于维拉卡肽的大批量生产。

为了实现本发明的目的，本发明提供以下技术方案：

一种固液相结合制备维拉卡肽的方法，包括以下步骤：

步骤1：将树脂和Fmoc-D-Arg(X)-OH偶联得到Fmoc-D-Arg(X)-树脂1；

步骤2：取步骤1所得的Fmoc-D-Arg(X)-树脂1依次偶联D-Ala-OH、D-Arg(X)-OH、D-Arg(X)-OH、D-Arg(X)-OH、D-Ala-OH、D-Cys(Y)-OH，再将氮端氨基乙酰化，得到全保护的维拉卡肽主链树脂；

步骤3：取步骤2所得的维拉卡肽主链树脂，加入裂解液1脱除保护基Y并切割树脂，活化主链Cys巯基，得到活化的维拉卡肽主链肽；